DB36T 885-2015 南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测技术规范

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1、ICS67.060B22备案号：48489-2016DB36江西省地方标准DB36/T885—2015南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测技术规范RuleofRT-PCRDetectiononSouthernRiceBlack-streakedDwarfVirus2015-12-21发布2016-03-15实施江西省质量技术监督局发布DB36/T885—2015目次前言............................................................................

2、....II1范围..............................................................................12术语和定义........................................................................13样品采集..........................................................................14样品处理..........

3、................................................................25总RNA提取........................................................................26RT-PCR............................................................................27琼脂糖凝胶电泳.........................

4、...........................................28凝胶成像分析......................................................................2附录A（资料性附录）南方水稻黑条矮缩病病原..........................................3附录B（规范性附录）TRIzol法提取总RNA技术流程.....................................4附录C（规范性附录）S

5、RBSDV标准样品RT-PCR电泳图....................................5I学兔兔www.bzfxw.comDB36/T885—2015前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由江西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所、江西农业大学农学院。本标准主要起草人：杨迎青、兰波、李湘民、崔汝强、孙晓棠、魏洪义、蒋军喜、陈洪凡、王广利、熊艳。II学兔兔www.bzfxw.comDB36/T885—2015南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测技术

6、规范1范围本标准规定了南方水稻黑条矮缩病毒（Southernriceblack-streakeddwarfvirus,SRBSDV）的样品采集、样品处理、总RNA提取、RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析。本标准适用于水稻疑似病株及白背飞虱样品对SRBSDV的RT-PCR检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1引物primer指一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。2.2退火温度annealingtemperatur

7、e为引物和模板结合时候的温度参数，当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。2.3反转录PCRreversetranscriptionPCR(RT-PCR)指一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。2.4琼脂糖凝胶电泳agarosegelelectrophoresis指用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。3样品采集3.1水稻疑似病株样品采集田间将疑似病株连根拔起，用吸水纸包住根部，整株带回实验室，保存于4℃冰箱、备用。3.2灯下白背飞虱样品采集收集测报灯下的白背飞虱，保

8、存于4℃冰箱、备用。3.3田间白背飞虱样品采集1学兔兔www.bzfxw.comDB36/T885—2015在发病田块采用盘拍法采集白背飞虱样品，4℃冰箱保存、备用。4样品处理4.1疑似病株样品处理取疑似病株叶片组织100mg，置于研钵中，加液氮研磨至粉末状。4.2白背飞虱样品处理取单头白背飞虱，置于2mL离心管中，用牙签捣碎成匀