基因沉默 RhoC 联合雷帕霉素对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究-论文.pdf

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1、郑鹏远等基因沉默RhoC联合雷帕霉素对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究第3期347-doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．03．013基因沉默RhoC联合雷帕霉素对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究郑鹏远谢淑丽张若岩吕国悦王广义(吉林大学第一医院肝胆外科，长春130012)中图分类号R392．11文献标志码A文章编号1000-484X(2014)03-0347-06[摘要]目的：通过基因沉默RhoC联合雷帕霉素阻断mTOR通路对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究，证明二

2、者联合能显著抑制肝癌侵袭、迁移，寻找治疗肝癌的新分子靶点。方法：RhoC．siRNA质粒转染BELT402细胞，荧光显微镜检测转染效率：Westernblot方法鉴定RhoC的基因沉默效果。实验分为6组：空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble—siRNA组、阴性对照Scramble—siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC—siRNA组、RhoC—siRNA+Rapa组。采用半定量RT．PCR法检测侵袭相关因子MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、P27RF—Rho以及凋亡

3、相关因子Survivin表达；免疫细胞化学法检测MMP2、MMPO的表达；采用划痕实验，细胞黏附实验，Transwell小室检测细胞的侵袭转移。结果：Scramble—siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC．siRNA组MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、p27RF—Rho、Survivin和空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble—siRNA组比较表达降低(P<0．05)，RhoC—siRNA联合Rapa组的表达显著降低(P<0．01)；Scramble．siRNA+R

4、apa组、Rapa组、RhoC—siRNA组抑制肝癌细胞侵袭和迁移(P<0．05)，而RhoC—siRNA联合Rapa组显著抑制肝癌细胞的侵袭迁移(P<0．o1)。结论：RhoC．siRNA联合雷帕霉素能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭，是治疗肝癌的良好分子靶点。[关键词]siRNA沉默RhoC；雷帕霉素；细胞侵袭和迁移CombinationofRhoC-siRNAwithRapamycininfluenceoninvasionandmetasta-sisofhepatocellularcarcin

5、omacellBEL7402ZHENGPeng—Yuan，XIEShu—Li，ZHANGYan—Yan，Lt)Guo—Yue，WANGGuang—Yi．DepartmentofHepatobiliarySurgery，FirstHospital，JilinUniversity，Changchun130012，China[Abstract]Objective：ToprovethecorrelationbetweenthefunctionofRhoCsignalingpathwayandthemTO

6、Rone，andfindthenewmolecule—remedytargetthroughtheresearchofRhoC—siRNAcombinedwithRapamycin(Rapa)influencingontheinvasionandmetastasisofHCC．Methods：TheplasmidRhoC—siRNAconductedwasusedtotransfectedintoBEL7402cells，andthetransfectionratewasdetectedbyfl

7、uorescencemicroscope．WesternBlotanalysiswasidentifiedfortheeffectoftransfection．Thisexperimentwasdi—videdintosixgroups：blankcontrolgroup，negativeplasmidgroup，negativeplasmidgroupwithRapa，RhoC—siRNAgroup，Rapagroup，RhoC—siRNAcombinedwithRapagroup．Thefa

8、ctorMMP2，MMP9，TIMP1，TIMP2，P27RF—Rhoandtheanti-apoptosisfactorsurvivinweredeterminedbyPCR．AndMMP2，MMP9wereexaminedbyimmunocytoehemicalmethod．Theinvasionandmetastasisofceilsweredetectedbywoundassay，celladhesionexperiment，Transwellinvasionassay．Results：