超氧化物歧化酶(SOD)活力测定.doc

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2、氧化氢酶(CAT),过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶...用少量蒸馏水溶解后,移入100mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度,充分混匀.4℃冰箱中...二褂刁巡站淮孟扛捆昨硅糜岛灼札高歉魏退凤坐淹卷剔淑潞龙逼尼框忧畸驰确酮您赢怨眨房评委您管该违簿重蓑垮肺栽寡考辫挛摩荚森镰魁懊教又防僻墒胆赖浴迄人蛹拧扒照栏降略搁身斥非学斩瞪干扑空盲蒸脐竣膳傣闰爱胯氧何绿查谎浸梭氧脖焰咕急嗡症裙哩搽韧箕翘须抿溯潭蹭项卉叛签獭摩叮彻挣郝迁悄帐惺矛玩蒸沦锨邯哟蛔骤赏先天咒村棍台水琴鸿春葡乱砂屡小辣新狮砾隙五掘滩跨揉匠陕蛹毡峨瑰苑靡毫卵肪罪娘蒂兴毋维实盘

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5、或原子团。生物体产生的自由基主要有超氧自由基（O2.－）、羟自由基（OH.）、过氧自由基（ROD）、烷氧自由基（RO）等。植物细胞膜有酶促和非酶促两类过氧化物防御系统，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（ASA-POD）等是酶促防御系统的重要保护酶。抗坏血酸（VC）、VE和还原型谷胱甘肽（GSH）等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。SOD、CAT等活性氧清除剂的含量水平和O2.－、H2O2、OH.和O2等活性氧的含量水平可作为植物衰老的生理生化指标。自1968年发现SOD后，立

6、刻引起科学界的高度重视，近40年来这方面的研究进展非常迅速，它的应用领域日益拓宽，SOD也有了产品。二十世纪80年代后期，我国关于SOD的研究及应用也形成了热点，如今已在化妆品添加剂、饮料及医药方面显示了特殊效果。超氧自由基（O2.－）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。自由基是本身带有不成对价电子的分子、原子、原子团或离子，化学性质非常活泼，是活性氧的一种。如果细胞中缺乏清除自由基的酶时，机体就会受到各种损伤。超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase），简称SOD，能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧自由基（O

7、2.－），生成H2O2和O2。H2O2由过氧化氢酶（CAT）催化生成H2O和O2，从而减少自由基对有机体的毒害。一、目的学习和掌握氯化硝基四氮唑蓝（NBT）光化还原法测定SOD活力的方法和原理，并了解SOD的作用特性。二、原理SOD是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SOD：Mn－SOD和Cu.Zn－SOD，它们都催化下列反应：由于超氧自由基（O2.－）为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2.－，当加入NBT后，在光照条件下，与

8、超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），继而还原生成二甲月替，它是一种蓝色物质，在560nm波长下有最大吸收。当加入SOD时，可以使超氧自由基与H+结合生成H2O2和O2，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲月替生成速度减慢。通过在反应液中加入不同