多重实时荧光定量PCR检测急性肝炎患者HBV和HCV方法的建立与意义分析-论文.pdf

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1、热带医学杂志2014年6月第l4卷第6期JTmpMed，Jun．2014，Vo1．14．No．6·751··实验研究论著·多重实时荧光定量PCR检测急性肝炎患者HBV和HCV方法的建立与意义分析陈泽惠，李欣钰2肖湘文z，丁渭，刘淑园2陈华云z(1．孝感市云梦县人民医院输血科，湖北孝感432500；2．中山大学达安基因诊断中心．广东广州510665)摘要：目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本，应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV，同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析

2、。结果新建立的多重实时荧光定量PCR体系．可以有效地检测HBV和HCV的阳性质控品及阳性样本。多重实时荧光定量PCR体系特异性较好，检测HBV和HCV时．两者之间无交叉反应，且以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性；多重实时荧光定量PCR体系检测HBV、HCV的灵敏度分别为20Iu／ml、50IU／ml；多重实时荧光定量PCR体系精密度好，检测HBV、HCV的CV值分别为0．11％、0．096％。在检测临床样本时，多重复合体系检测血清或血浆中HBV和HCV的检出率与单独检测HBV和HCV具有很好的一致性，且HBV和HCV的一致率分别达到97．7％(k=0．952)、98．8％(

3、k=0．976)；同时有6例样本出现HBV和HCV共感染。结论新型多重实时荧光定量PCR方法对快速检测及筛查HBV和HCV较快捷，而且特异性好、灵敏度高、精密度好。因此多重实时荧光定量PCR方法对2种肝炎病毒的检测具有重要意义。关键词：多重实时荧光定量PCR；急性肝炎B／C病毒：快速检测中图分类号：R512．6文献标识码：A文章编号：1672．3619(2014)06．0751．04Anovelmultiplexreal-timePCRassayestablishedfortheconcurrentdetectionofhepatitisBandCvirusesinpatients、thac

4、utehepatitisCHENZe·hui。，LIXin—yu，XIAOXiang-wen，DINGWei，LIUShu—yuan，CHENHua—yun(J．ThePeople'sHospitalofYunmengCountyinXiaogan，Hubei，Xiaogan432500；2．GeneDiagnosisCenterofSunYat—senUniversity，Guangdong，Guangzhou510665，China)Abstract：ObjectiveAnovelmultiplexreal—timePCRassayforconcurrentdetectionofhepa

5、titisviruseswasevaluatedf0ritsclinicalperformanceinscreeningpatientswithacutehepatitis．MethodsAtotalof596serumorplasmasampleswerecollectedfrompatientswithacutesymptomsofhepatitis．ConcurrentdetectionofnucleicacidsofHBVandHCVwasperformedusingthemultiplexreal—timePCR．Atthesametime，singlereal·timePCRwa

6、salsousedtodothedetectiontest．ResultsThenovelmultiplexreal—timePCRassaycouldefectivelydetectedHBVandHCVwithgoodspecificity，showingnocrossreactionswitheachotherandnofalsepositiveresultsfornegativecontrolsamples．ThesensitivitiesfordetectingHBVandHCVwere20IU／ml，and50IU／ml，respectively．Theaccuracyofthe

7、methodwasgood，withtheCVvaluesfordetectingHBVandHCVwere0．11％，and0．096％，respectively．Concordanceratesbetweentheresultsfromthemultiplexreal-·timePCRandthesinglereal·-timePCRtestsforthedetectionofHBVandHCVwere9