实时荧光定量PCR的数据分析方法-论文.pdf

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1、技术通讯⋯一，N140LETrIvTI．ERSINBIOTECHNOLOGYVOI．ZO。o．·1lJan．,2un1l5jdoi：10．39690．issn．1009—0002．2015．01．O3l综述实时荧光定量PCR的数据分析方法易健明，屈武斌，张成岗1,21．军事医学科学院放射与辐射医学研究所，蛋白质组学国家重点实验室，全军军事认知与心理卫生研究中心，北京100850；2．安徽医科大学研究生院，安徽合肥230032[摘要]实时荧光定量PCR是目前检测目的核酸拷贝数及分析靶基因在mRNA表达水平相对变化的主流技术。研究表明，分析结果的准确性依赖

2、于数据分析方法的可靠性。我们简要综述实时荧光定量PCR的数据分析方法。[关键词]实时荧光定量PCR；绝对定量；相对定量；动力学法[中图分类号]Q89[文献标识码]A[文章编号]1009一o002(2015)01—0140—06DataAnalysisMethodsofReal__TimeFluorescentQuantitativePCRY／Jian—Ming，QuWu—Bin，ZHANGCheng—Gang，1．BeijingInstituteofRadiationMedicine，StateKeyLaboratoryofProteomics，Mil

3、itaryCognitiveandMentalHealthResearchCenter，Beijing100850；2．GraduateSchool，AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032；ChinaCo—correspondingauthors，QUWu～Bin，E—maihquwubin@gmail．com；ZHANGCheng—Gang，E—mail：zhangcg@bmi．ac．cn[Abstract]Real—timefluorescentquantitativePCR(Q-PCR)isaneleganttech

4、niquewhichwasusedtoquantifythecopynumberofnucleicacidaswellastoanalyzethemRNAexpressionleveloftargetgene．Itwasshownthattheaccuracyofresultwasdependentonthevalidityofdataanalysismethod．Inthisarticle，thedataanaly—sismethodsofQ—PCRwerereviewed．[Keywords]real-timefluorescentquantita

5、tivePCR；absolutequantitation；relativequantitation；kineticmethod实时荧光定量PCR(real—timefluorescence1指数模型数据分析法quantitativePCR，Q—PCR)是目前检测核酸含量以及分析基因在mRNA表达水平相对变化的主流技术，指数模型数据分析法的理论基础认为nu：在产具有准确性高、特异性强、灵敏度高和操作简便等优物扩增曲线的指数扩增期(图1)，反应体系内的引点，广泛应用于临床医学和生命科学等多个学科领物和底物过量，DNA聚合酶过量且保持高活性，因域]。Q—PC

6、R反应的工作原理是在PCR反应体系此PCR反应的扩增效率保持最大值不变，扩增产物内加入荧光基团(荧光探针或荧光染料)，利用荧光的数量以指数形式增加，相应的指数函数表达式(方信号积累实时检测整个PCR反应过程，得到产物扩程1)为X．=X0(1+)，其中表示第轮循环反应结增曲线(图1)，然后采用合适的数据分析方法，计束后的扩增产物数量，表示初始模板数量，表示算初始模板数量(绝对定量)或初始模板数量的相对平均扩增效率。方程1经过对数变换后，得到方程比值(相对定量[7-8]oQ—PCR反应的数据分析方法，1．6按照定量分析的目的，可划分为绝对定量法和相对1。4

7、定量法；按照数据分析方法基于的理论基础和数学1．2模型，可划分为指数模型数据分析法和动力学法--。1．Ot-0．8LI-O6收稿日期：2014—05—09O．4基金项目：国家重点基础研究发展计划(2012CB518200)；国家自然O．2科学基金(30900862，30973107，81070741，81172770，31371345)；蛋白质组学国家重点实验室开放课题(SKLP—O201104，SKLP—0．OK201004，SKLP一0201002)；国家科技重点专项(2012ZX09102301—016)cycle作者简介：易健明(1985一)，

8、男，硕士研究生通信作者：屈武斌，(E—mail)quwubin@gmaf1．com；张成岗，(