快速导流杂交基因芯片法检测人乳头瘤病毒的实验观察.doc

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1、快速导流杂交基因芯片法检测人乳头瘤病毒的实验观察【摘要】目的探讨导流杂交基因芯片法（HybrMax法）在人乳头瘤病毒基因分型中的应用价值。方法利用快速导流杂交基因芯片技术对来我院妇科门诊就诊的796例妇女进行下生殖道IIPV感染分型检测；选取其中502例，依据细胞学病理结果分为正常细胞学组、慢性炎症组、宫颈上皮内瘤变组（CIN组）和宫颈癌组，将各组HPV分型结果进行比对分析。结果细胞学正常组HPV感染率12.06%,慢性炎症组为23.69%,CTNI组33.69%,CINII组59.61%,CINIII组为79.54%,宫颈癌组为96%,组间感染率对比差异有统计学意义（P

2、〈0.05）。各组均有IIPV多重感染情况，一且随着病变程度的加重，HPV多重感染率逐渐升高，组间差界有统计学意义（P<0.05）o结论快速导流朵交基因芯片技术HPV分型检测结合宫颈细胞学检查对宫颈病变患者的随访检查和疗效观察有重耍的临床应用价值，対宫颈癌的早期预防和治疗意义重大。【关键词】导流杂交基因芯片法；人乳头瘤病毒；实验观察流行病学研究证实人乳头瘤病毒（HuinemPap订lomavirus,HPV）感染是女性宫颈上皮内瘤变（Cervicalintraepithelialneoplasia,CTN）和宫颈癌的主要病因，对HPV感染的检测和分型是处理宫颈病变的重要依

3、据⑴。IIPV的不同型别引起细胞病理的类型改变不同，因此，准确的基因分型，及时明确患者感染HPV的基因型别对感染的治疗、宫颈病变的预防及流行状况的调查均有重要的意义[2]o我们采用核酸分子快速导流杂交基因芯片分型技术（HybrMax法）对我院妇科门诊796例妇女进行了HPV感染的分型检测，实验结果报告如下。1资料与方法1.1一般资料2009年4月至2012年3月在我院妇科门诊就诊患者796例，采用HybrMax法检测人乳头瘤病毒并进行基因分型。随机选取502例，年龄21〜53岁，平均年龄（36±11・5）岁，其中宫颈细胞学检查正常者116例，细胞学异常者386例。对细胞学

4、检查异常者在阴道镜下行宫颈多点活检进一步作病理学检查，诊断标准采用2001年国际癌协会TBS诊断系统。包括：宫颈慢性炎症（炎症组）173例，宫颈上皮内瘤变I级（CINI组）92例，上皮内瘤变II级（CINII组）52例，上皮内瘤变III级（CINIII组）44例，宫颈癌组25例，所有标本采集和诊治过程均经就诊者本人同意。1.2实验方法H卩V分型检测的标本取样步骤和耍求按宫颈细胞学取材常规进行，标本放置在专用样本收集管内，4°C保存两周内检测。导流杂交基因芯片IIPV分型试剂盒由凯普生物化学有限公司提供，能够检测21种基因型；PCR扩增用扩增仪由厦门安普利生物医学有限公司提

5、供。样本检测时严格按操作程序进行DNA提取、扩增、快速导流杂交，肉眼对样本结果进行判读。1.3统计学方法应用SPSS10.0软件进行统计分析，组间比较用t检验，率的比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1应用导流杂交基因芯片法检测796例患者IIPV结果796例患者标本中,HPV基因检测阳性率为29.15%(232/796)o2.2导流朵交基因芯片与病理组织学检查结果的比对随机选取的502例患者样木中，基因芯片技术检测HPV基因分型阳性176例，阴性326例。阴性病例以正常细胞学及低度以下病变(慢性炎症和CINI)为主，占90.49%,高度病变(CI

6、NII、CINIII)及宫颈癌占9.5%o阳性病例中随着病变程度增高，HPV感染率亦逐渐升高，各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)o以病理组织学结果为标准，导流朵交基因芯片技术诊断宫颈癌的敏感性为96%,特异性为68.13%,阳性预测值为13.63%,阴性预测值为99.69%,结果见表1。2.3不同组别患者导流杂交基因芯片检测IIPV的基因型分布情况176例阳性标本中检测出14种基因型，其中高危基因型10种，低危基因型4种。HPV基因型感染率由高到低为：HPV-16(22.7%)、HPV-58(8.5%)、HPV-52(8.5%)、HPV-18(8.0%)、HPV-

7、33(7.4%)、CP8304(6.3%)、HPV-53(5.7%)、HPV-31(5.1%)、HPV-11(5.1%)、HPV-68(4.5%)、HPV-42(4.5%)、HPV-59(3.9%)、IIPV-39(3.4%).IIPV-44(2.8%)。前七位均为高危基因型，统计显示宫颈癌组HPV高危基因型感染率为92%,明显高于炎症组和CIN组,差异有统计学意义(P〈0・05)；HPV-16型感染率最高且与宫颈癌病变严重程度正相关(卩〈0.01)。2.4不同组别患者导流杂交基因芯片检测HPV多重感染结果分析，各组均有多重感