人乳头瘤病毒.ppt

《人乳头瘤病毒.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测湖北省肿瘤医院雷旦生人乳头瘤病毒（HPV）HPV(人类乳头瘤病毒)是以人类为唯一宿主的一种DNA病毒，现在已经明确，HPV与宫颈癌的发生高度相关。医学数据表明，60％～70％的女性感染过HPV病毒，99.8％的宫颈癌患者中可以检测到HPV，而HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。除此之外，98％以上的宫颈疾病患者体内也存在HPV。目前有100余种型别HPV,约35种型别与生殖道感染有关，大约20种型别与癌症相关。与宫颈癌相关的高危型HPV有13种：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，

2、59，68。与宫颈癌相关的低危型别有：6，11，40，42，43，44。HPV基因分型检测的意义•宫颈病变及宫颈癌的筛查，通过分型检测对患者个体化评估，预测宫颈病变发生的风险度,决定筛查的间隔、治疗方案的制定。•未明确诊断意义的非典型鳞状细胞和腺细胞（AS-CUS/AGUS）和宫颈上皮内低度病变（LSIL）的分流，提高诊断的可信度，降低漏疹风险。•宫颈病变治疗后的追综和随访HPV阳性还可提示生殖器赘生物为尖锐湿疣的可能性。HPV感染与宫颈炎的发生有密切关系。HPV病毒也可引起宫颈糜烂。宫颈癌筛查方案1.基本筛查方案醋酸或碘染色后肉眼观察阳性

3、阴性阴道镜活检+病理检查相应治疗定期随访2.一般筛查方案HPV检测+传统巴氏涂片HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H随访（次/3-5年随访（次/年阴道镜检查/多点活检+ECC相应治疗（-）（+）3.最佳筛查方案HPV检测+液基细胞学检查HPV（-）Cyto≤ASC-USHPV（+）Cyto≤ASC-USHPV（-）Cyto≥ASC-HHPV（+）Cyto≥ASC-H随访（次/3-5年随访（次/年阴道镜检查/多点活检+ECC相应治疗（+）（-）HP

4、V基因分型检测的方法我科目前采用分子生物学前沿技术—多重PCR（聚合酶链式反应）先进技术，通过对HPV-DNA基因分型，可快速、准确地检测常见的23种HPV亚型，包括5种低危型（HPV6，11，42，43，44）和18种高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆盖了现有已知的与人生殖道感染有关的绝大部分HPV亚型。HPV基因分型芯片技术特点HPV基因芯片分型检测，利用L区相对保守区的引物对待测样品中可能HPV亚型进行广谱扩增，再将产物与固定在膜芯片上的亚型特异性探针进行杂交，显色并判读结果。此技术灵敏、准确、高效、快速，并确定具体亚

5、型。GC-HPV检测实验流程HPV检测目标物：宫颈脱落细胞、疣体组织、组织切片、活体组织阴道镜下“活检”组织的采集通过阴道镜观察宫颈表面血管的病变，并用宫颈活检钳或宫颈管刮勺从宫颈上提取可疑组织，装入有保存液的洗脱管中，旋紧管盖，做好标识疣体样本的采集用棉拭子在疣体表面剐蹭4-6遍，也可以把通过手术切除下来的疣体直接作为检测样本。专用的宫颈脱落细胞采集器步骤1.标本采集扩阴器暴露宫颈口，用棉拭子将分泌物擦去将宫颈刷伸入宫颈口，单向轻柔转动4-5周将其放入有保存液的洗脱管中旋紧管盖，做好标识将宫颈刷折断，刷头留在管中步骤二：提取HPVDNA1

6、3000rpm10分钟，弃上清将标本转移到1.5mL微量离心管中加50L裂解液充分悬浮沉淀100℃加热10分钟13000rpm离心10分钟，保留上清待用步骤三：PCR扩增50℃15min95℃10min94℃30s42℃90s40cycles72℃30s72℃5min51℃洗脱15min步骤四：杂交与洗脱设定杂交仪的温度，无需看守，于51℃杂交1小时PCR产物加入杂交缓冲液中,沸水浴变性10min步骤五显色与结果判读POD孵育POD洗涤显色前准备配制显色液,显色检测结果：膜条显色直接提示感染的HPV亚型，包括高危及低危亚型。HPV6HPV

7、11HPV16HPV18HPV31HPV33HPV35HPV39HPV42HPV43HPV45HPV51HPV52HPV53HPV56HPV58HPV44HPV59HPV66HPV68HPV73HPV83HPVMM4PC适用人群：三年以上性行为或21岁以上有性行为的女性宫颈病变及宫颈癌患者治疗后的随访尖锐湿疣患者咽喉部HPV感染导致的疣体增生的婴幼儿受检前须知：月经来潮后10-18天为最佳检查时间检查前三天内不要用避孕药膏等阴道内用药物及阴道冲洗检查前24小时最好不要有性生活HPV检验报告单将分为高危及低危两组报告结果，并注明两组中具体的阳

8、性亚型，未注明的表示为阴性。例：HPV-DNA分型报告单高危组阳性（+）16，33低危组阴性（-）结果分析HPV-DNA阳性：20％－30％的HPV病毒感染会引起疾病，如果HPV