菊花高频再生体系建立及农杆菌介导FT基因转化的研究.pdf

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1、分类号：墨鱼墨2密级：公珏菊花高单位代码：学号：100862鲤墨墨圣墨频再生体系建立及农杆菌介导FT基因转化的研究StudiesonEstablishmentofHighFrequenceRegenerationSystemandAgrobacterium--mediatedTransformationofChrysanthemumwithFT学位申请人：刘冰指导教师：肖建忠教授杨际双副教授学科专业：园林植物与观赏园艺学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月二十九日独创性声明本

2、人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：主t＼冰签字日期：钆11年步月叼日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰堡盛些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，

3、允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦壅些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：袁、1琳箩月明日I学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：翮躲舻k椽纽签字日期：矽l1年岁月1日电话：邮编：摘要IIIIIrlIIIrlrlIIIIIIY1897092菊花是原产于我国的十大名花之一，但是绝大多数品种的菊花自然花期集中在11月左右，能够在夏季或早秋开花的只有少数花色单调、花型较

4、小的品种。因此菊花的生产发展因为其花期问题受到了严重制约。FT基因是一个激酶抑制蛋白，可以通过对CO对FT的调节促进开花。本试验旨在通过对菊花高效再生体系及根癌农杆菌介导的转化体系的研究，将Fr基因导入到菊花品种‘神马’中，以期获得花期提前的菊花新品种，并为广泛运用转基因技术改良菊花品种打下基础。本试验以菊花品种‘神马’为试验材料。研究了不同激素浓度配比对菊花直接诱导不定芽再生以及对生根诱导的影响，对菊花的再生条件进行了优化，从而获得了菊花叶片高速快效的再生体系。试验结果表明，将菊花‘神马’叶盘接种在

5、MS+NAA1m∥L+6．BAlmgrL培养基上，经过20天的组织培养后，可直接再生出不定芽，而且再生率高达95．5％，再生芽在I／2MS+NAA0．7mg／L培养基上经过10天左右可诱导出根，生根率可达100％。在菊花品种‘神马’高效再生体系建立的基础上，利用根癌农杆菌介导的遗传转化法对其遗传转化进行了研究。研究结果表明，叶盘预培养时间、侵染时间、共培养时间以及延迟培养时间均对菊花的遗传转化效率有较大影响。同时得出经过预培养12h的叶盘置于菌液侵染5min，黑暗共培养3d；延迟筛选3d时菊花遗传转化

6、率最高。共培养后将叶盘接种到MS+NAAling／L+6．BAlmg／L+Km20mg／L培养基上进行抗性芽的筛选培养。25天后可直接分化出不定芽，当不定芽长到1-2cm左右时转到I／2MS+NAA0．7m∥L+Km20mg／L培养基上进行生根筛选培养。在加km的培养基中连续筛选8周以上，将期间产生的抗性芽切下接种在含有20mg／Lkm的生根培养基中进行二次筛选，提取能够正常生根的抗性苗的DNA，进行PCR检测，共获得PCR阳性植株7株，转化率大约0．90／o．说明目的基因FT整合到菊花的基因组中。关

7、键词：菊花；根癌农杆菌；遗传转化；Fr基因StudiesonEstablishmentofmghFrequenceRegenerationSystemandAgrobacterium-mediatedTransformationofChrysanthemumwithFTAuthor：．LiubingTutor：．XiaoBanzhongYangJishuangMajor：．LandscapePlantandOranmentalHorticultureAbstractChrysanthemumisone

8、ofthetenfamousflowerwhichoriginatedinourcountry．butmostvarietiesofthembloomconcentratedinNovemberorso，atthesametimeonlyafewalittlekindsofcolorsandsmallertypeofflowerscanbloomatsummerorearlyautumn．Therefore，thedevelopmentofchrysan