木薯西选03再生体系建立及农杆菌介导遗传转化初探

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1、巧古学化论义＂，，木善西选０３再生体系建立及农杆菌介导遗传转化初探‘诗二背—－＇１．：；其解诸卑杳Ｖ；．．．．ｆ／之．．扩Ｖｖ＊＇＇■ｈ；－■■■．．．．Ｉ．＊‘■Ｊ王燕Ｊｒ１Ｈ爲爲乂缘＾―二〇—五年六月Ｍｉｍｍ—Ｉ４ＨＨＩ巧ｎｗｓａＢ＾分类号Ｓ５３３密级公开ＵＤＣ６３３．６硕±学位论文＇＇＂木馨西选０３再生体系建立及农杆菌介导遗传转化初探王燕学科专业楠物学指导教师杨美纯教授

2、论文答辩日期２０巧年５月２４日学位授予日期２０１５年６月成宜答辩委员会主席何龙飞教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除己特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究王作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广

3、西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。０不保密。＂＂请在Ｗ上相应方框内打Ｖ（）论文作者签名：撫曰期；次的帥闲习期６肖指导教师签名：蹄私也１日：Ｗ巧叩作者联系电话：电子邮箱；ｗ西迭＂木著０３再生体系建立及农杆菌介导透传转化初探摘要广

4、西是我国木馨种植第一大省一，围绕木善淀粉加工形成的系列木馨加工产业链‘‘＂，是广西经济组成的重要部分。西选０３是广西大学选育的木曹优良品种，耐旱、产量高，具有较高的经济和推广价值，采用转基因方法把抗逆基因导入优良木著品＂。种中可有效提高抗逆性，改良木著品种本试验主要研究西选０３幼嫩茎段贩芽为外植体建立快繁体系、Ｗ获得的无茵苗幼嫩叶片为材料建立离体叶片再生体系Ｗ及初步建立农杆菌介导的无苗叶片遗传转化体系，结果如下：１．外桂体灭菌．１％ＫＭｎ〇０ｍｉｎ和７５％酒精２０，；经过０４预处理１浸泡Ｓ后大

5、田栽培、室内水培、大棚沙培来源的外植体用０．１％ＨｇＣｋ分别灭菌ｌＯｍｉｎ、５ｍｉｎ、６ｍｉｎ效果最好，污染率分别为３０．８％、１１．１％、１７．１％，成活率分别可达６１．５％、８０．０％、７４．４％。２－．初代培养：添加低浓度６ＢＡ的培养基中外植体蔽芽萌发优于ＫＴ和ＴＤＺ，一最适宜初代诱导的培养基为ＭＳ＋－６ＢＡ化０５ｍｇ／Ｌ，外植体在周内萌发，萌芽率达９０．０％，萌发芽长势良好。３＋－．继代增殖：单芽增殖培养宜采用ＭＳ６ＢＡ０．１ｍ／Ｌ培养基ｇ，芽增殖倍数＋－ｍ可达４．６＋；密集

6、丛生芽培养宜采用ＭＳ６ＢＡ０．３ｍ／ＬＧＡ３０．５／Ｌ培养基ｇｇ：无菌芽壮苗培养宜采用ＭＳ＋ＰＰ３３３３．０ｍｇ／Ｌ培养基，无茵芽节间缩短、増粗。４．生根：单独添加ＮＡＡ、ＰＰ３３３或者直接用ＭＳ培养基均可诱导无菌芽生根，其中ＷＭＳ＋ＰＰ３３３０．３ｍｇ／Ｌ诱导生根效果较好，根短而粗壮，生根率达１００％，平均根数６．９。５．生根苗移栽；取生根３条左右，株高３＾ｃｍ的健壮组培苗移栽至草炭：姪石：＝菜园±１：１：１的基质中，３０ｄ成活率可达５５．１％。６．愈伤组织诱导；Ｍ

7、Ｓ＋毒莽定口ｍｇ／Ｌ＋ＣｕＳ〇４０．５ｍｇ／Ｌ适合作为无菌叶片愈伤组织诱导培养基，出愈率法１００％。形成愈伤组织呈淡黄色，部分愈伤组织块表面有颗粒状突起。７．愈伤组织继代：最佳的愈伤组织继代培养基为１／２ＭＳ＋毒莽定１２ｍｇ／Ｌ，Ｉ８６．７％増殖率达，用此培养基继代，可使硬化愈伤组织块变得疏松，表面颗粒状突。起明显，为转化成巧性愈伤组织做准备８．愈伤组织分化诱导：采用生长素类与细胞分裂素类植物生长调节剂配合使用＋－＋ｍ＋诱导愈伤组织产生不定芽，分化率极低。采用ＭＳ６ＢＡ

8、１．０ｍｇ／ＬＩＡＡ０．５ｇ／ＬＡＮ〇０＋一３．５ｍ／ＬＣｕＳ〇４０．５ｍ／Ｌ培养基可定程度上提高不定芽的分化率ｇｇｇ，但仍然不足１５％。乂抗生素筛选：分别对带胶芽茎段、无菌叶片和愈伤组织块进行抗生素Ｋｍ耐＋－受压筛选６ＢＡ０．０５ｍ