大豆整体子叶节再生体系的建立及应用于农杆菌介导遗传转化初探-论文.pdf

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1、第31卷第6期大豆科学V01．31No．62012正12月SOYBEANSCIENCEDec．2012大豆整体子叶节再生体系的建立及应用于农杆菌介导遗传转化初探张福丽，舒文涛，张怡，高丹，张丽，陆亚杰，罗祥，李成伟(1．周口师范学院生命科学系，植物遗传与分子育种重点实验室，河南周口466001；2．周口市农业科学院，河南周口466001)摘要：以中黄20、周豆02005、周豆11和周豆18整体子叶节为材料，以MSB为基本培养基，通过L(3)正交设计研究了6-BA、IBA和KT9种浓度组合对大豆整体子叶节丛

2、生芽再生的影响；并将大豆的整体子叶节应用于农杆菌介导的遗传转化研究。结果表明：9种激素组合中以MSB+3．0mg·L6-BA+0．1mg·LIBA+0．5mg·LKT最适合周豆02005丛生芽的诱导，而MSB十3．5mg·LI16一BA+0．2mg·L。。IBA+0．2mg·LKT最适宜周豆11、周豆18和中黄2O的丛生芽诱导；4个大豆基因型中，以中黄2O的丛生芽数最多；丛生芽用于诱导生根时，IBA为0．8mg·L～、NAA为0．8—1．0mg·L时较适合大豆生根，其中以中黄20生根数最多。以中黄20整体

3、子叶节为材料，进行了农杆菌介导的遗传转化研究。PCR分析和GUS染色初步表明，外源基因转入了大豆的基因组中，转化率为7．8％，得到转基因植株的周期为35～42d。关键词：大豆；整体子叶节；再生；农杆菌介导；遗传转化中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000—9841(2012)06-0865-04ClusterBudInductionofSoybeanWholeCotyledonaryNodeandApplicationinAgrobacterium--mediatedGeneticTran

4、sformationZHANGFu．1．i．，SHUWen．tao，ZHANGYi，GAODan，ZHANGLi，LUYa-jie，LU0Xiang，LICheng-wei(1．KeyLaboratoryofPlantGeneticsandMolecularBreeding，DepartmentofLifeScience，ZhoukouNormalUniversity，Zhoukou466001，Henan；2．Zhouk—ouAcademyofAgrieuhuralSciences，Zhoukou466

5、001，Henan，China)Abstract：Theeffectsofnineconcentrationcombinationsof6-BA，IBAandKTdesignedbyorthogonaldesign[L9(3)]wereevaluatedoninductionofsoybean『Glycinem(L．)Merrill1multi—shootfromwholecotyledonarynodes．Foursoybeangenotypes，includingZhouhuang20，Zhoudou

6、02005，Zhoudou11andZhoudou18，wereusedasplantmaterials，whileMSBwasusedasbasicmedium．Theresultsshowedthatnineconcentrationcombinationshaddifferenteffectsoninductionofmulti．shootforsoybeanwholeeotyledonarynodes．TheregenerationsystemwasfurtherusedtoAgrobacteri

7、um—mediatedgenetictransforma-ti0n．Forninec0ncentrati0ncombinations，MSB+3．0mg·L一6一BA+0．1mg．L一IBA+0．5mg·L一KTforZhoudou02005andMSB+3．5mg·L一6一BA+0．2mg·L一IBA+0．2mg·L一KTforZhouhuang20．Zhoudou11andZhoudoul8wereopti—mumtoinducemulti—shootthanothercombinations．For

8、fourgenotypes，theregenerationeficiencyofmulti—shootforZhou—huang20wasthehighest．Theconcentrationof0．8mg·L～forIBAand0．8-1．0mg·L一forNAAwasmuchmoresuitableforsoybeanrooting．androotingefficiencyofZhonghuang20wasthehighe