农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化技术流程及操作要点_赵.pdf

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1、第30卷第3期大豆科学Vol.30No.32011年6月SOYBEANSCIENCEJun．2011农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化技术流程及操作要点赵晓雯，吴芳芳，狄少康，柏锡，纪巍，李勇，才华，朱延明(东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要:大豆遗传转化效率低，是大豆转基因育种亟待解决的重要问题。以大豆子叶节为外植体采用农杆菌介导法，系统地研究了大豆子叶节遗传转化各技术环节的操作要点，包括工程菌液制备、无菌苗获得及外植体制备、农杆菌的侵染及共培养、不定芽诱导、不定芽伸长、根诱导、驯化与

2、移栽、抗性植株的获得及转基因植株的检测等，建立了一套较稳定、高效的大豆子叶节遗传转化体系。并利用该体系，将野生大豆耐盐碱相关基因A1对大豆品种绥农28、合丰50、合丰55、东农50进行遗传转化，系统地探讨了大豆基因型、影响T-DNA的转移效率的各环节、筛选剂浓度及不同基因型转化效率等几个重要因素。关键词:大豆;遗传转化;农杆菌介导;子叶节;技术流程中图分类号:S565.1文献标识码:A文章编号:1000-9841(2011)03-0362-07TechniqueflowandKeyOperationPoi

3、ntsofAgrobacterium-mediatedGeneticTransformationofSoybeanCotyledonaryNodeZHAOXiao-wen，WUFang-fang，DIShao-kang，BAIXi，JIWei，LIYong，CAIHua，ZHUYan-ming(CollegeofLifeScience，NortheastAgiculturalUniversity，Harbin150030，Heilongjiang，China)Abstract:Thelowsoybeang

4、enetictransformationfrequencywasoneofthedifficultproblemsthatneededberesolvedinsoy-beantransgenicbreeding．Inthisstudy，thesoybeancotyledonarynodewasusedasexplants，andthetechniqueflowandkeyoperationpointsofAgrobacterium-mediatedtransformationmethod，includin

5、gAgrobacteriumpreparation，explantandasepticseedlingpreparation，infectionandco-cultivation，adventitiousbudinduction，shootelongation，regenerationoftransgenicplantlets，planthabituation，obtainingofantibioticresistantdetectionoftransgenicplants，wassystematical

6、lyinvestigated．Therefore，astableandefficientgenetictransformationsystemusingsoybeancotyledonarynodesasexplantswasestablished．Usingthistransformationsystem，A1geneisolatedfromGlycinesojawastransformedintofoursoybeancultivars，includingSuinong28，Hefeng55，Hefe

7、ng50andDongnong50．Andseveralimportantfactorsaffectingthetransformationefficiencywerealsodiscussedintheexplant．Keywords:Soybean;Genetictransformation;Agrobacterium-mediated;Cotyledonarynode;Techniqueflow［3］大豆遗传转化效率低，是目前国内外基因工程等报道了农杆菌转化大豆子叶节的影响因素，发与分子生物学领域亟

8、待解决的重要问题。大豆遗现用超声处理过的子叶节较对照容易转化。1999［4］传转化方法主要有农杆菌介导法、基因枪法、电激年Zhang等以Bar基因作为筛选标记基因，农杆法、PEG法、显微注射法、超声波辅助农杆菌转化法菌法转化大豆子叶节频率达3%。2003年Olhoft［1］［5］和花粉管通道法等。其中，农杆菌介导法具有操等相继报道了在培养基中添加硫醇类化合物和作简单、效率高、周期短、可插人外源基因片段大、L-半胱氨酸可以防止由