农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴转化方法的比较及优化

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1、第２９卷第４期大豆科学Ｖｏｌ．２９Ｎｏ．４２０１０年８月ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＡｕｇ．２０１０农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴转化方法的比较及优化段莹莹，赵琳，陈李淼，李文滨（东北农业大学大豆研究所，教育部大豆生物学重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００３０）摘要：以东农５０、东农４２和黑农４４的子叶节和下胚轴为外植体，对农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴２种转化方法进行了比较和优化。结果表明：不同转化方法对大豆的品种要求不同，东农５０适合子叶节转化法，而黑农４４－１适合下胚轴转化法。在子叶节转化体系中，卡那霉素的筛选浓度是１００ｍｇ·Ｌ，在下胚轴转化体系中，卡那霉素－１的筛选浓度是７５ｍｇ·Ｌ，可

2、见下胚轴体系比子叶节体系在卡那霉素筛选过程中表现得更为敏感。在子叶节和下－１胚轴转化体系中，最适乙酰丁香酮浓度均为２００ｍｏｌ·Ｌ，最适共培养时间均为３ｄ。在子叶节转化体系中，５ｄ苗龄时转化率最高，而下胚轴转化体系中，４～６ｄ苗龄时转化率均较高，以６ｄ苗龄最高。关键词：大豆；子叶节转化；下胚轴转化中图分类号：Ｓ５６５．１文献标识码：Ａ文章编号：１０００９８４１（２０１０）０４０５９００４ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｏｙｂｅａｎｂｙＵｓｉｎｇＣｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙＮｏｄｅａｎｄＨ

3、ｙｐｏｃｏｔｙｌＥｘｐｌａｎｔｓＤＵＡＮＹｉｎｇｙｉｎｇ，ＺＨＡＯＬｉｎ，ＣＨＥＮＬｉｍｉａｏ，ＬＩＷｅｎｂｉｎ（ＳｏｙｂｅａｎＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｉｏｎａｌＥｄｕｃａｔｉｏｎａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｏｙｂｅａｎｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｄｕｓｉｎｇｔｈｒｅｅｓｏｙｂｅａｎ

4、ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ，Ｄｏｎｇｎｏｎｇ５０，Ｄｏｎｇｎｏｎｇ４２ａｎｄＨｅｉｎｏｎｇ４４．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｒｅｑｕｉｒｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｙｂｅａｎｖａｒｉｅｔｉｅｓ．Ｄｏｎｇｎｏｎｇ５０ｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｔｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｌｅＨｅｉｎｏｎｇ４４ｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｔｏｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｃ

5、ｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ－１－１Ｋａｎａｍｙｃｉｎｗａｓ１００ｍｇ·Ｌ，ｗｈｉｌｅｉｎｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓ７５ｍｇ·Ｌ，ｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｈａｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｔｏｋａｎａｍｙｃｉｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｃｅ－１ｔｏｓｙｒｉｎｇｏｎｅｗａｓｂｏｔｈ２００ｍｏｌ·Ｌ，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅｗａｓｂｏｔｈ３ｄｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏ

6、ｄｅａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ．Ｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｗｈｅｎｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇａｇｅｗａｓ５ｄ，ｗｈｉｌｅｉｎｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎ４６ｄ，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｗａｓ６ｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｏｙｂｅａｎ；Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ；Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ大豆是重要的

7、粮食和油料作物，也是植物蛋化的首选方法。白、脂类、维生素和矿物质等物质的天然资源。大子叶节是诸多农杆菌介导的大豆遗传转化报［２］豆的高效遗传转化一直是大豆植物基因工程领域告中最为成功的受体材料，Ｃｈｅｎｇ等用无菌苗子［１］的难点之一。目前应用于大豆遗传转化的方法叶节首次报告成功。但由此转化系统获得的转化主要有根癌农杆菌介导法、基因枪法、真空抽滤法植株嵌合体较多，导致后期鉴定、筛选、传代和纯化和花粉