农杆菌介导大豆未成熟子叶节遗传转化及转录因子gmptf1在大豆中的表达

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1、河北科技师范学院硕士学位论文农杆菌介导大豆未成熟子叶节遗传转化及转录因子GmPTF1在大豆中的表达姓名：钟磊申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：李桂兰201206中文摘要以冀豆12的未成熟种子作为外植体，研究了6．BA浓度、取材时间、发育程度对不定芽诱导的影响。试验结果表明，大豆未成熟胚子叶节的最优再生条件是当豆荚种子发育到最大(开花后60．66d)，豆荚开始由绿变黄时，在6一BA浓度在1．0～1．5mg／L条件诱导下，出芽率最高，达到了96．67％一100％，子叫‘节平均出芽数为1．6~

2、2．57个。以冀豆7的未成熟子叶节为外植体做遗传转化研究，探讨了外植体的低温预处理、共培养温度、共培养基pH值对转化效率的影响。结果表明，在开花60d左右，籽粒发育到最大，产生的抗性芽较多；对外植体4℃预处理降低了抗性芽数；共培养温度为24℃、培养基pH值为6．6和24h光照条件下抗性芽产生率高。豫豆22、冀豆7、品系12的平均抗性芽数较高，到达2．11．2．18个。利用根癌农杆菌介导大豆子叶节遗传转化法将转录因子基因G聊P刑导入大豆品种豫豆22，得到了11个T1代的G聊P阿J转基因株系。通过荧光定

3、量PCR检测G聊尸刑在转基因植株的表达以及测定转基因植株和未转基因植株在低磷胁迫条件下的形态和生理生化表现差异，分析G聊P刑基因在导入大豆后发挥的生物学功能。结果表明：转基因植株的G珑P删表达量明显高于未转基因对照大豆，其中以TI．32和T1．40为最高。在低磷胁迫下，转基因大豆的根系长度、根表面积、根体积、叶面积、光合色素含量、磷吸收速度及叶片磷含量都显著高于未转基因对大豆，而丙二醛含量显著低于未转基因大豆，表明转基因植株的耐低磷能力要优于未转基因大豆。关键词：大豆；未成熟种子子叶节；转化；转录因

4、子；G聊尸硎；耐低磷IIAbstractImmatureseedsot。Jidou12wereusedasexplantsmordertoresearchtheimpactof6-BAconcemration，samplillgtirllea11dthedegreeofdeVelopmemonadVentitiousbudsiIlduction．TheresultsshowedthattheoptiIllalregenerationconditionsofthesoybeani工I】matureco

5、tyledollssectionwasthepodseeddeVeloped如1ly(anernowering60-66d)，whenpodsbegantoturnyellow．When协ducedi11theconditionthat6-BAconcentrationwas1．0～1．5mg／L，buddingratereachedto96．67％～100％，andtheaVeragebuddillgamountwas1．6～2．57．ImmaturecotyledonsnodeofJidou7w

6、ereusedasexplantstoreserachtheimpactofthelow—tenlperaturepretreatmentoftheexplants，i11cubationtemperatu．re，co-mediumpHandgenotypeontheemcienCyofAgrobacterium-mediatedgenetictransformation．Theresultsshowedthat，about60daysaRerno、verillgwhenthesizeofseeds

7、reachedthe旬llextent，rnoreresistantshootswereproduced．TheI舢瑚turecotyledonsproducedf-ewresistantshootswhentreatedat4℃beforei11fection．Undertheconditionof24℃ofincubationtemperature，pH6．6ofco-mediumand24hoursi11umination，therateofresist锄shootsreachedtheh迢h

8、est．TheaVeragenunlberofresist锄tshootswashi曲erintheⅧietyofYudou22，Jidou7andPinXi12thanothersoybeanVarietisinthisstudy．ThetranscriptionfactorgeneG聊P7FJwastransferredintosoybean(G纱c砌Pm僦L．』溉Ⅳ．c．V．Y．udou22)by彳g阳6ac陀“扰聊-mediatedsoybeancotyled