农杆菌介导磷高效转录因子osptf1转化大豆的研究

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1、ByWeiDongSupervisor：Prof．BaomingTianHuizhenLiangCropGeneticsandBreedingBioengineeringdegrtmentaepartmentMay，2012或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：亘孜哆稃日期：刃二年石月争目，～摘要大豆是我国重要的油料作物之一，也是重要的粮饲作物。磷是大豆生长和发育的必需元素

2、，土壤中磷多以固态磷形式存在，植物难以吸收。长期以来，‘人们一直通过施用化学磷肥来补充土壤中磷素，这虽然使作物产量得到大幅度提高，但也随之出现了一系列生态和环境问题，化肥严重，环境恶化，投入效率下降等。通过转基因方法提高大豆对磷素的吸收和利用是一条可行的办法。为了得到能够高效吸收利用磷素的大豆转基因新品种，本论文以磷高效吸收利用基因OsPTFl为目的基因，通过根癌农杆菌介导法将OsPTFl基因转入大豆中。目的基因OsPTFl来自水稻基因组，将其与NOS终止子连接之后插入带有35S启动子的pCAMBIAl300中，之后

3、连同启动子和终止子一起切下插入植物高效表达载'体pTFl01．1中，转入根癌农杆菌EHAl05得到含有目标基因的工程农杆菌。利用本实验筛选的受体基因型，通过PPT筛选得到16株抗性植株，经过PCR分子初步检测，有3株转化植株整合有仍沪删外源基因。为提高大豆转化效率，对部分黄淮海地区大豆品种基因型进行筛选。将含有p1300-221(含GIJs)植物表达载体的根癌农杆菌对备选的大豆基因型进行遗传转化，首先对预培养时间和受体组织部位进行试验，通过对共培养三天的子叶节进行GUS染色，鉴定各品种的转化效率，选择适宜作为转化受体

4、的基因型。备选的大豆品种有：豫豆22、郑59、商豆1099、郑04023、郑04063、Jack共-六个品种。研究结果表明，实验的大豆品种豫豆22、郑59、郑04023、郑04063接种Ms培养基后五天裂瓣现象比较严重，我们将预培养时间由传统5d改进为2-3d，有效的减轻了子叶节处木质化现象和子叶裂瓣现象，?GUS染色后比较结果表明商豆1099和Jack／t曼染效果较好，这两个品种GUS染色效率分别是41．3％和43．2％j经过进一步愈伤诱导发现，这两个品种愈伤生长情况也较好。我们对受体组织部位也进行了比较，结果表明

5、，子叶节比胚尖染色效果好。其次，我们利用嫁接技术巧妙的解决了分化成苗时间长和生根困难的问题。选用有完整的生长点并出现了分化，有新鲜输导组织的愈伤作为接穗，嫁接到萌发7天左右、生长健壮、两片子叶展开90度左右的的豆苗上，减去了传统转基因育种方法中诱导丛生芽、芽伸长和生根的环节，通过嫁接技术，可以将从愈伤到成苗的时间从一个半月缩短到10天左右，而且成本低，容易成活。关键词：大豆农杆菌磷高效OsPTFl基因转基因expressionvectoragrobacteriumtumefacienscontainedp1300-2

6、21(containingGUS)，alternativesoybeangenotypestestedfirstpre-culturetimeandreceptortissues-daycotyledonnode,throughtheco-culturedGUSstahlingidentificationoftheconversionefficiencyofanvarieties,theappropriatechoice弱thetransformationofthegenotypeofthereceptor．Soyb

7、eanvarietiesZheng59，Yudou22，Shangdoll1099，theZhengEH04023，theZhengEH04063andJack，inoculatedOilMSmedium,theresultsindicatethatafterinoculationZheng59andsomeothervarieties，thegrowthofcotyledoncrackingphenomenonisserious．Inaddition,theinductionofcallusisⅡrri目录目录摘要

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．IAbstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．】[I目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．：．Ⅳ1文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1大豆转基因研究进展⋯⋯⋯⋯⋯