根癌农杆菌介导大豆转化LePTl基因的研究-论文.pdf

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1、第33卷第1期大豆科学Vo1．33No．12014正2月S0YBEANSCIENCEFeb．2014根癌农杆菌介导大豆转化Pn基因的研究张兴政，王昌陵，卢福荣，韩阳，宋书宏(1．辽宁大学生命科学院，辽宁沈阳110036；2．辽宁省农业科学院作物研究所，辽宁沈阳110161)摘要：采用根癌农杆菌介导大豆胚尖的遗传转化方法将番茄的LePTI基因导入辽豆17基因组中，以期获得能够高效利用磷素的转基因大豆新品种。PCR结果表明，T0和T，代植株基因组均扩增出1．6kb的目的条带，测序并进行在线Blast比对表明该条带与LePTI基因相同，与试验预期相一

2、致。结果表明LePT1基因已成功转入R代植株，并在T。代大豆基因组中稳定遗传。关键词：大豆；胚尖；遗传转化；根癌农杆菌介导；LePT1中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2014)01-0031一D4TransformationofLePT1GeneintoSoybeanv／aAgrobacterium-mediationZHANGXing．zheng，WANGChang．1ing，LUFu—rong，HANYang，SONGShu．hong(1．SchoolofLifeSciences，LiaoningUniv

3、ersity，Shenyang110036，China；2．CropInstitute，LiaoningAcademyofAg6culturalSciences，Shenyang110161，China)Abstract：Forthesakeofeultivatingsoybeangermplasmwithhigherphosphorusacquisitioneffieeney，aLePTIgeneclonedfromtomatogenomewastransformedintosoybeanembryostipsviaAgrobactium—m

4、ediation．PCRresultsshowed1．6kbbandwasamplifiedfromToandTlgenomerespectively，moreover，sequencingandonlineBlastresultsindicatedthattheamplifiedgenewasinaccordancewithLePT1．Insummary，theLePT1genewastransformedintoT0plantsandinheritedsteadilyinTlgeneration．Keywords：Soybean；Embry

5、ostips；Transformation；Agrobacterium—mediation；LePT1磷不仅参与植物的正常光合作用、呼吸作用以介导法将LePT1基因转入大豆，以期获得能对磷及能量储备，还能提高植物的抗逆能力，是植物在素高效吸收利用的大豆新种质。生长发育过程中所必需的大量元素之一。面对土1材料与方法壤中可被植物吸收的可溶性磷素含量非常低的现状，进一步提高植物对磷素的吸收利用能力至关1．1材料重要[2-3]。植物对磷素的吸收主要通过两种磷酸盐1．1．1植物材料大豆(GlycinemaxL．Merril1)品转运蛋白系统，即低亲和力系

6、统和高亲和力系统，种辽豆17，由辽宁省农业科学院惠赠。相较于组成型表达的低亲和力转运系统，低磷诱导1．1．2植物表达载体及菌株LePTI基因克隆于型高亲和力转运系统更能体现出植物对低磷胁迫番茄(Solanumlycopersicum)基因组，其基因序列登的适应性。目前，LePT1、LePT2、StPT1以及StPT2录号为AF022873．1；以卡那霉素抗性为筛选标记的等高亲和力磷转运蛋白基因的成功克隆及其相关pCAMBIA2300．LePTI融合植物表达载体和根癌功能研究也为实现提高植物磷素的吸收能力提供农杆菌菌株LBA4404，由本实验室保

7、存。了基因选择和理论基础。1．1．3大豆遗传转化过程培养基质所用培养基LePT1基因克隆于番茄(Lycopersiconesculentum的基本培养基是MSB培养基，即含有MS基本盐以L．)基因组，该基因表达水平受磷缺失显著诱导lL5J，及B有机物，其中1／2MSB为MS微量元素减半，其使番茄能有效适应低磷胁迫环境。同时，在低磷胁他营养成分不变。迫条件下，转LePT1基因烟草(Nicotianatabacum)和在大豆遗传转化过程中，将获得的大豆胚尖外水稻(Oryzasativa)植株的磷素吸收能力也显著提植体接种于添加有3．5mg-LBAP

8、的MSB培养基高_6～。本研究以大豆胚尖为外植体，采用农杆菌进行预培养，预培养后转接至添加有5mg·LBAP收稿日期：2013-06-07基金项目：辽