根癌农杆菌介导大豆转Bt-crylA抗虫基因-论文.pdf

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1、中国油料作物学报2013，35(1)：029—035ChineseJournalofOilCropSciencesdoi：10．7505／j．issn．1007—9084．2013．O1．005根癌农杆菌介导大豆转Bt—crylA抗虫基因蓝岚，吴帅。，申丽威，王志坤，孟凡立，宋波，拓云，刘珊珊(东北农业大学，大豆生物学教育部重点实验室，农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室，黑龙江哈尔滨，150030)摘要：通过根癌农杆菌介导法，以子叶节为外植体将抗虫基因crylA转入东农50大豆品种中，对获得的Tn、T和T植株采用PCR、RT—PCR及Southem杂交法进行分子

2、检测，并对转基因大豆进行食心虫室内抗性鉴定。经PCR鉴定，r0植株有4株为阳性植株，．r_有3株为阳性植株，r2有9株为阳性植株。对3株T1阳性植株进行RT—PCR检测，均扩增得到1800bp目标片段，Southern杂交分析显示，有2株出现杂交信号，分别为单拷贝和双拷贝。室内抗虫鉴定表明转基因植株食心虫抗性明显优于对照品种，在蛋白质及脂肪酸含量等品质性状上，与对照没有显著差异。证明cryIA基因已整合到受体大豆基因组中，该基因在大豆．rl转基因植株中能够正常转录，抗虫基因crylA的导入可以提高东农50对大豆食心虫的抗性，其后代的遗传稳定性还有待于进一步的研究。关键

3、词：大豆；根癌农杆菌；子叶节；crylA；遗传转化中图分类号：$565．103，$431．12文献标识码：A文章编号：1007—9084(2013)01—0029—07TransgenicofsoybeanwithBt——crylAgenemediatedbyAgrobacteriumtumefaciensLANLan，WUShuai§SHENLi—wei，WANGZhi—kun，MENGFan—li，SONGBo，TUOYun，LIUShan—shan，(KeyLaboratoryofSoybeanBiologyinChineseMinistryofEducatio

4、n，KeyLaboratoryofSoybeanBiologyandBreeding／GeneticsofChineseAgricultureMinistry，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin，150030，China)Abstract：ThetransgenicplantswereobtainedbyAgrobacterium—mediatedtransformationofsoybean(DongNong50)cotyledonnodes．ThetransformationofcryIAwasconfirmedbyPCR

5、，RT—PCRandSouthemblot．Theresistancetosoybeanpodboreroftransgenicplantswasdetectedbybioassaymethod．114P一resistantplantswereobtainedand4，3and9positiveplantsfromTo，T1andT2generationsrespectivelyweretestedbyPCR．A1800bptargetfragmentwasdetectedbyRT—PCRfrom3T1transgenicplantsandthehybridizati

6、onbandscouldbedetectedbySouthern—blotassayintwoT1transgenicplants．ThegeneofcrylAwassuccessfullyintegratedintothegenomeoftransgenicplantsandcouldbetranscriptednormallyinT1generation．Additionally，theresultsofbio—assayindicatedthatthetransgenicplantsdisplayedhighinsect—resistancetosoybeanp

7、odborer．Furtherinvestiga-tionsonthegeneticstabilityofcrylAindifferenttransgeniclinesandgenerationsaretobecarriedout．Keywords：Soybean；Agrobacteriumtumefaciens；Contyledonarynodes；crylA；Genetictransformation大豆虫害是影响产量与品质的重要因素之一，种类型又可分为许多亚类。crylA属于cryt的一个虫害防治最经济有效的措施是种植抗性品种。亚类，包括cry