根癌农杆菌介导bg2基因遗传转化花生的研究

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1、莱阳农学院硕士学位论文摘要根癌农杆菌介导BG。基因转化花生的研究摘要花生是重要的油料兼经济作物，真菌病害是花生的主要病害，导致其产量和品质严重下降。单纯依靠常规育种方法很难选育出对真菌病害高抗的品种。而利用遗传转化将外源基因导入花生栽培种则应具有一定的可行性。本研究首先对花生组织培养植株再生方法进行研究，建立了胚小叶高效再生体系，然后利用遗传转化体系，通过衣杆菌介导法，将B一1，3-葡聚糖酶基因转入花生品种花育22，以提高花生抗病性。主要研究结果如下：l彳1用8个花生品种对花生组织培养进行研究，结果表明：(1)基因型对再生率有很大影响，不同花生品种的愈伤组织形

2、成和不定芽发生有明显的差异。(2)花生外植体对花生组织培养的植株再生具有很大影响，胚小叶的芽诱导率明显高于子叶、胚轴、胚根等其它外植体。(3)胚一1-叶的叶龄对不定芽诱导有很大影响，萌发5、6天的种子的胚小叶有利于诱导不定芽的形成，其中萌发6d的胚小叶最高，芽诱导率为91．3％。(4)以花生胚小叶作为外植体用于组织培养离体再生，具有取材简单，来源丰富，再生率高的优点，可将其用于农杆菌介导的基固转化。(5)不同培养基对不定芽的伸长有很大影响，试验发现，添加4mg／LBAP的培养基，芽伸长比较明显，添加10mg／LBAP的培养基中芽丛生明显。2．确定了krn的选择

3、压，芽诱导培养基中添加km最低浓度为50mg／L可有效抑制非转化愈伤组织的形成或芽再生。添加500mg／LCb可有效抑制衣杆菌LBA4404的生长，且对花生外植体的再生无显著影响。3，对农杆菌介导遗传转化的适宜条件进行研究，结果表明：(1)预培养3天的花生胚小叶外植体最适宜进行基因转化。(2)菌液浓度对转化率影响较大，以OD。，=O．1为最好。(3)适宜侵染时间为10一15mjn，转化率较高。(4)农杆菌共培养时间3d，转化率较高。(5)种子萌发后6d的胚小叶为受体转化效果最好。4．将D—l，3一葡聚糖酶基因转入花生栽培品种。利用优化的遗传转化体系，以萌发6d

4、的花生品种花育22的胚小叶为外植体，经农杆菌LBA4404侵染，Kin筛选和标记基因PCR检测，得到目的基因转化植株。5．确立了衣杆菌介导途径进行花生遗传转化的技术规程：选用花生品种白沙1016或花育22的成熟饱满的种子。经表面消毒后，接种于催芽培养基上，取萌发6d的胚小叶，接种于MSB5+6．0rrI∥LBAP+I．0m∥LNAA培养基上预培莱Ⅲ农学院硕士学位论文』l{：i要养3d。用活化的农杆菌重悬浮菌液(OD㈣=0．4)浸染10—15rain，共培养3d，经700mg／LCb浸泡冲洗后，转接到MSB5+6．0mg／LBAP+I．0mg／LNAA+50Km

5、+500Cb筛选培养基上继续培养。3w后，将带抗性芽点的愈伤转接到MSB5+10m∥LBAP+50Km+500Cb的再生筛选培养基上诱导丛生芽。2w后将丛生芽转接到MSB5+10mg／LBAP+50Km+500Cb的培养基上促进芽的伸长，每2w继代一次。当芽伸长到3-4cm，转到MSB5+0．5mg／LNAA+50Km+500Cb培养基中诱导生根。关键词：花生(A．hypogaeaL．)；再生体系；根癌衣杆菌；遗传转化；13—1，3葡聚糖酶基因(BG：)型圈丛堂堕堡：!望：焦堡塞．垒堡!!堡垒笪!StudiesofGeneticTransformationof

6、BG2GeneintoPeanut(ArachishypogaeaL．)MediatedbyAgrobacteriumtumefaciensAbstractPeanut(ArachishypogaeaL)isanimportantoilandcommercialcrop．butfugidiseaseisitsmainplantdisease，whichseriouslyreducesitsyieldandquality．Itisdifficulttosolvethisproblembytraditionalbreedingmethod，butitcouldpo

7、ssiblybesolvedbytransfonninganti—fugalgenetopeanutcultivars．Inthispaper,theefficientplantregenerationsystemofpeanuttissueculturewasestablished．Withthissystem，B一1，3-GlucnasegenemediatedbyA．tumefitcienswasintroducedintopeanutcultivarsHuayuNo．22Theresultswereshowedasbelow．1Thetissuecul

8、tureandefficientpla