农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体系优化-论文.pdf

《农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体系优化-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、植物遗传资源学报2012，13(5)：789—797JournalofPlantGeneticResources农杆菌介导的大豆子叶节非组织培养遗传转化体系优化李丹丹，张洁，刘娜，陈琰，韩胜芳，王冬梅(河北农业大学生命科学学院，保定071001)摘要：本研究以GUS基因在子叶节区的瞬时表达为依据，通过探讨影响农杆菌转化效率的因素，优化了大豆子叶节非组织培养遗传转化体系；利用该体系对冀豆16号进行Bar基因的遗传转化，并使用针刺法对转基因植株进行草铵膦筛选。结果表明，侵染液中附加3％蔗糖、OD㈣=0．6、以脱脂棉作为茵液附着介质同时不添加表面活性剂SilwetL．7

2、7、侵染1次的GUS阳性率最高达到62．13％。草铵膦抗性植株经PCR检测获得T阳性植株1O个，转化率为2．5％。经PCR和RT—PCR鉴定共获得3株T．阳性植株，初步证明目的基因已整合到大豆基因组中。关键词：大豆；子叶节；非组织培养；遗传转化；草铵膦筛选OptimizationoftheAgrobacterium-MediatedGeneticTransformationSystemofSoybeanCotyledonaryNodeWithNonTissue-CultureLIDan—dan，ZHANGJie，LIUNa，CHENran，HANSheng—fan

3、g，WANGDong·mei(CollegeofifeSciences，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001)Abstract：ByinvestigatingthefactorsinfluencingthetransformationefficiencyofAgrobacterium，agenetictransformationsystemofsoybeancotyledonarynodewithnontissue--culturewasoptimizedusingthetransientexpres·-siono

4、fGUSintheregionofcotyledonarynode．GeneBarwastransformedintosoybeanJidou16，andthetransgenicplantswerescreenedbyglufosinateinjectedonleaves．Theresultsindicatedthatinfectionmediumcontains3％sug—ar，OD60o=0．6，noneSilwetL-77withtheabsorbentcottonasattachedmediaandthehighestpercentageofGUSpos

5、itivewas62．13％byonetime．Weobtained10positiveplantsinT0generationafterdetectedthetransgenicplantsresistanttoglufosinatebyPCR．Thetransformationefficiencywas2．5％．ThreepositiveplantsofTlgenera—tionwereobtainedbyPCRandRT—PCR，whichdemonstratedthatthetargetgenewasintegratedintothesoybeangeno

6、me·Keywords：Soybean；Cotyledonarynode；Nontissue—cuhure；Genetictransformation；Glufosinatescreening大豆是全球重要的经济作物，是食用油和蛋白叶节遗传转化体系仍存在着组织培养过程中茎伸长的主要作物来源¨。。利用分子育种的方法可以提和生根难的问题，因此尝试建立一个非组织培养的高大豆的产量及品质。目前，在大豆的遗传转化中子叶节遗传转化体系是解决上述问题的有效途径。常用的方法主要有农杆菌介导法和基因枪法，王全伟等。。以大豆幼苗的顶端生长点和叶腋生长而农杆菌介导法中又以子叶节法最为常

7、用。子点为靶点，通过农杆菌介导的整体转化法——注射叶节转化体系具有操作简便、外植体获得不受季节法进行转录因子DREBIC基因的遗传转化，最终获限制、操作周期较短等特点。但农杆菌介导的子得1株阳性植株。该方法克服了大豆组织培养再生收稿日期：2011-10—10修回日期：2011—12—09基金项目：河北省科技攻关计划项目(042401116D．1)；转基因生物新品种培育重大专项子课题(2008ZX08004-002—1-5；2009ZX08004-001B2011ZX08004—002-002)作者简介：李丹丹，硕士研究生，研究方向为植物抗逆生理及遗传转化。E—ma

8、il：li