发根农杆菌介导的菘蓝IsatisindigoticaFort遗传转化及植株再生体系的建立

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1、西南师范大学硕士学位论文发根农杆菌介导的菘蓝（IsatisindigoticaFort.）遗传转化及植株再生体系的建立姓名：汪洪申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：孙敏2003.5.1缩写词英文名称2，4一D6一BAbOCefe王A罄DNA蕊VEBEDT丸HPLCIAAKanKTM譬MSNAANPT．IIOD6001)CRPEG孙{珏SDSTE1Ws缩写词表中译名称2,4-dichlorophenoxyacetic2,4-二氯笨氧乙酸6-benzylaminopurine6-苄基氨蒸嘌呤Ba

2、sepair碱基对cefotaxime头孢噻腭钠Cetyltriethylammoniumbromide十六娩基三雩基浚讫胺Deoxyribonucleic脱氧核糖梭酸Dryweight干重EthidiumBromide澳乙锭Ethylenediaminetetraceticacid己二胺豳乙酸Highperformanceliquidchromatogram高效液相恕谱Ind01．3，acteticacid吲哚．3．乙酸Kanamycin卡臻霉蠢6-FurfurylaminopurineMer

3、captoethanolMurashigeandSkoogmediuma—naphthaleneaceticacidNeomycinephosphotransferaseIIOpticaldensityat600nmPolymerasechainreactionPolyethylenglycolRevelationsperminuteSodiumdodecycsulpateTris，EDTAbufferTri(hydroxy—methyl)aminomethaneV6．糠氨基嘌呤巯萋乙醇MS培养

4、然a一萘乙酸糯霉素磷酸转移酶Il600hm吸光度聚会酶链式反应聚乙二醇每分锌转数十二烷基磺酸钠三羟甲基氨基甲靛，EDTA缓冲液三羟甲基氮基甲婉糕南螂范大学辙士攀经论文发根农秆菌介鼯辨衽蓝遗抟转纯晟植抹辑生体茉的建立发撮教秆蓠介导的菘蓝遗蒋转纯及穗株褥黛体系的建立擎零睾专鼗；越耪学指导教师：孙敏教授骚究骞疯；攘鐾生餐学每生魏按零研究生：溉j!I；(2000254)摘要蘩藏([scttismdigoticaFort+)不筏麓褰藤驰串药耱，藤菇龟是工业艨染籁承重要艨羁之一，用量极大，在全国范围内广为栽

5、培。本文利用发椒农杆菌RiT-DNA建立并优化了籍糖体菘蓝翁逡传转馥薅系，黉对髯釜{妻株的主要彳弋谢产穆靛蓝、旋玉霞遗簿了蠢羹硷测，筛选了谎懿笼往慕，也麓实彩}深藏焱、藏病等藻戮豹簿入葵怒了基磋。1熬溉并筛进丁豳倍棒藉蓝穗状根优良纛髋篆}以鳃傣俸菘藏嚣莹麓豹子蛄必努撞馋，疲瘸发根农桴蘸A《窝R1000藏璞逮诱导撼了t。逶拣缀，结票袭鞠，A毒菌株潞菘蓝毛状裉的诱导优予R1000，毛状糠的诱导频率赢遮100％，褥裰率麓遮30戳主；添翱0．5rag／l豹IAA能挺藏蘸狡蔽熬诱导鞭率；光照黠嬲髂体菘蘸雹

6、状根豹诱导极必重要，缺光条{譬下不越诱导出镳状摄；提取罨状辍DNA送行PCR分析，捡溺剽了ro／B、rotC基医，褒饔嘏妖粳确系转纯援+毛竣授能在蚕食经簿激索的MS固／液体培养基中快速生长，且表现出多分支，多根溅，失谣向地性嫩长簿熟穗亳状疆特经；建立了TRAl，TRA2，TRA3，TRA4疆令秀拔掇无效系。对疆整抟壤狡裰鞠、∥二僚舔亳妖报佟了魄较，疆倍俸菘蓝毫姣摄擞长速度大予二嵇髂。y，2麓赢并优化丁滋状擞植株辫生体系，，激进三静途径弼获褥毛羧梭襻生建糠。t(1)扶毛敞檬上直接分化出不定芽帮裰。

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8、：2,4．D对毛获穰惑伤缀媛诱导壤受疆嚣，6-BA对愈穆疆缎豹诱警作两不嘴显，但2,4．D和6-BA黻合使用对愈伤缀织诱导有裁。愈伤缒织诱导簸健培养蒸为：MS+O5mg／l2，4-I)+o，5m醣6-BA，愈傍组织生妖的最毽培养基为MS÷01rag／12,4一D+0lmg／t6-BA：愈伤组缎能在不食激素的壤养基上囊发避分化擞不定芽，惶分化频率较低，掰6-BA辩不定势熬分纯馋蘧鞍鞠显，瓣套蔹燃6-BA耱NAA慰劳豹诱警及缮势率较好，不定蒡瀵嚣懿疆鹱蝰莠蘩蠢MS+lo氆∥lNAA+§+5mt∥l6