流苏石斛再生体系与农杆菌介导遗传转化系统建立的研究

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1、却愛韻＇．．ｒ懼、．＇。＇Ｖ－盖—ＩＩ巧古学化．４．■．：＇．．Ｕ，．一占．，’？＇．，Ｊ流苏石解再生体系与农杆菌介导遗传转化系统建立的研究＇Ｗ．Ｖ．■．ｒ黄超群？．．■■？．－：．１Ｉ．，Ｌ化一磕偷如ｒ一０五年五月—ｌｉｌｉｌｔｅ＇，分类号Ｓ７２２．３密级公开ＵＤＣ编号硕古学位论文流苏石解再生体系与农杆菌介导遗传转化系统建立的研究黄超群学科专业生态

2、学指导教师奠昭展教授秦武明教授论文答辩日期２０１５年５月２２日学位授予日期２０１５年６月答辩委员会主席温远光教授广西大学学位论文原创性和使用授枚声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已持别加标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究王作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归

3、属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即；学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于；□保密，在年解密后适用授权。材不保密。＂＂请在Ｗ上相应方框内打Ｖ（）论文作者签名．ｐ；為賓群曰期；如ｊｒ／ｙ占．指导教师签名：曰期；妙ｒ．、作者联系电话；；电子邮箱流苏石斜再生体系与农杆菌介导遗传转化系统建立的硏究摘要

4、一流苏石解ＣＯｅｗｄｒａＷｗｎ仇ａｆＷＭ．Ｈｏｏｋ是我国药用植物中很重要的）个品种，具有很好的药用价值，主要有滋阴清热、生津止渴等功效，主要分布于广西、贵州、云南等地，生长于温暖湿润和半阴半阳的气候环境。由于野生资源被过度采挖利用，加上其本身对生存环境的较高要求且产生的种子自然的繁殖率低化及生长缓慢的问题，已鑛临灭绝。因此，选育新品种、建立快繁体系Ｗ及利用基因工程进行改良成为当前流苏石解研究的重点。本文流苏石解种子为材料，建立流苏石解再生体系和农杆菌介导的遗传转化体系，为今后流苏石解基因王程育种提供重要的

5、参考依据。主要试验的结论如下：１．Ｗ流苏石解种子为起始外植体，研究了基本培养基、植物生长调节剂、附加物等因素对流苏石解原球茎的诱导、增殖培养及原球茎芽分化和壮苗生根的影响＋６－ＢＡ。结果表明；（１）种子诱导原球茎最佳培养基为：ＭＳ１＋Ｎ＋－．ＯｍｇＡＭ０．２ｍｇ／ａ２４Ｄ１．ＯｍＬ牛３０Ｌ＋４．Ｏ，ｇ／薦糖ｇ／琼脂ｇ／Ｌ，经培养４０ｄ原球茎诱９０％ｙＭＳ＋６－；ｌ上（２）ＢＡ１５导率可达．；最佳增殖培养基配方为：ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ＋证Ａ０．４ｍｇ／Ｌ＋歳糖３０ｇ／Ｌ＋王豆汁巧

6、％＋活性炭０．５ｇ／Ｌ＋－琼脂４．０１０３２ＭＳ＋６ＢＡｇ／Ｌ，増殖系数可达Ｗ上；（）最佳分化培养基为：１／０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＭ１．０ｍｇ／Ｌ＋糜搪３０ｇ／Ｌ＋±豆汁１５％＋琼脂４．０ｇ／Ｌ，分化率４＋＋可达９０％；（）最佳壮苗生根培养基配方为：腑０．１ｍｇ／ＬＫＴ０．５ｍｇ／ＬＩＭ＋＋＋＋薦糖３０ｇ／Ｌ±豆汁巧％活性炭０．日琼脂４．０／Ｌ１００％。ｇ／Ｌｇ，生根率可达２．流苏石解原球茎作为受体材料，通过筛选卡那霉素和教予青霉素Ｉ的工作浓度后，利用正交试验

7、设计对农杆菌介导流苏石斜遗传转化的转化条件进行优化１）２００ｍ。结果表明：（卡那霉素浓度为ｇ／Ｌ能够有效抑制非转化材料的生长，可作为抗性植株初步筛选的浓度；（２）幾节青霉素浓度为２００ｍｇ／Ｌ能够完全抑制农杆菌的生长，可作为遗传转化脱菌时的最佳浓度；（３）农杆菌介导遗传转化的最佳条件；浸染时间２０ｍｉｎ、０〇６。。值为０．８、共培养时间日ｄ、添加己醜Ｔ香丽ＡＳ５０ｕｍｏｌ／Ｌ时，获得的转化率最高。试验对已经筛选了２个月的抗性原球茎进行ＰＣＲ鉴定，表明已得到了转化阳性的原球茎，初步证实目的基因已整合到流苏

8、石解的基因组中。关键词：流苏石解再生体系农杆菌介导遗传转化转基因植株ｎｍ－ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＲｅｅｎｅｒａｔｉｏｎＳｓ化ａｎｄＡｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄ