实验一 还原糖和总糖含量的测定.doc

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1、实验一还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法。二．原理在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶

2、（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/LHCI（6）6ml/LNaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤1.制作葡萄糖标准曲线：取7支25ml刻度试管，编号，按如下操作。操作项目管号0123456葡萄糖标准液（ml）00.20.40.60.81.01.2蒸馏水（ml）21.81.61.41.210.83,5-二硝基

3、水杨酸（ml）1.51.51.51.51.51.51.5吸光度（A540）0.0000.0810.2170.3310.4670.5750.648将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水

4、调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml6mol/LHCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml定容过的水解液，

5、移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。（3）显色和比色，取4支25ml刻度试管，编号，按下表的量操作。操作项目还原糖测定管号总糖测定管号ⅠⅡ还原糖待测液（ml）1100总糖待测液（ml）0011蒸馏水（ml）00113,5-二硝基水杨酸（ml）1.51.51.51.5吸光度（A540）0.3030.2980.4100.414吸光度（A540）平均值0.3010.421五、注意事项：标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。六、结果处理（1）由管、吸光度平均值在葡萄糖标

6、准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg由管Ⅰ、Ⅱ吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.235mg（2）计算样品中还原糖和总糖的百分含量如下：还原糖℅=0.557℅总糖℅=0.235℅七、问题讨论1.面粉中主要含有何种糖？答：淀粉2.糖含量定量测定的方法还有哪些？答：①高效液相色谱法（HPLC）②苯酚-硫酸法③蒽酮法④双折射现象幻想著亲爱的用户：烟雨江南，画屏如展。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，感谢你的阅读。1、最困难的事就是认识

7、自己。21.7.277.27.202123:0323:03:13七月-2123:032、自知之明是最难得的知识。二〇二一年七月二十七日2021年7月27日星期二3、越是无能的人，越喜欢挑剔别人。23:037.27.202123:037.27.202123:0323:03:137.27.202123:037.27.20214、与肝胆人共事，无字句处读书。7.27.20217.27.202123:0323:0323:03:1323:03:135、三军可夺帅也。星期二,七月27,2021七月21星期二,七月27,2

8、0217/27/20216、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。11时3分11时3分27-七月-217.27.20217、人生就是学校。21.7.2721.7.2721.7.27。2021年7月27日星期二二〇二一年七月二十七日8、你让爱生命吗，那么不要浪费时间。23:0323:03:137.27.2021星期二,七月27,2021