还原糖和总糖的测定

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1、生物化学综合实验报告题目：3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖姓名:学号：同组成员：分院(系)：专业班级：指导教师：完成日期：年月日1.实验目的用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量2.实验原理先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。3.实验仪器和试剂试剂：1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/LHCl，6mol/LNaOH仪器：25,100ml容量瓶、1,5ml吸量管、50ml移液管、100ml量

2、筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱4.实验步骤一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0毫升在加入蒸馏水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1.5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min，冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线，用1号样调零，测其分光度，制得标准曲线。二、还原糖提取:取3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50摄水中保温20min，离心，取滤液，用100ml容量瓶

3、定容得还原糖待测液。总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5mlHCL溶液，8ml蒸馏水搅匀，100摄下恒温水浴30min，冷却，NaOH调节PH至中性，离心，滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液。测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1.0、1.0、0、0毫升，总糖0、0、0、0.5、0.5毫升，蒸馏水2.0、1.0、1.0、1.5、1.5毫升，DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度。5数据处理葡萄糖标准曲线表管号0123

4、45含糖总量（mg）00.20.40.60.81葡萄糖标液（ml）00.20.40.60.81蒸馏水（ml）21.81.61.41.21DNS试剂（ml）1.51.51.51.51.51.5吸光度A00.040.1170.1920.3350.46山芋中还原糖和总糖测定表管号空白66’77’还原糖待测品（ml）01100总糖待测液（ml）0000.50.5蒸馏水（ml）2111.51.5DNS试剂（ml）1.51.51.51.51.5吸光度A00.0040.0071.3421.435测量得还原糖和总糖：m

5、还原糖=0.4235*（A6+A6’）/2=0.0019mgm总糖=0.4235*（A7+A7’）/2=0.1910mgω还原糖=m曲线葡萄糖*(V总/V测）/m样品*100%ω还原糖=0.0019*(100/1)/3000*100%=0.0063%ω总糖=m曲线葡萄糖*(V总/V测）/m样品*100%ω总糖=0.191*(100/0.5)/200*100%=19.1%6.注意事项n离心时中心对称的离心管质量要基本相等n可以增加山芋粉的质量来使得还原糖易于测量7．思考题nDNS比色法是如何对总糖进行测定

6、的？用HCl水解总糖中的非还原性糖从而得到还原糖进而测其所含的量n绘制标准曲线时所取得物质质量和体积必须精确，标准物质浓度不能过高否则与分光度不成线性关系，在测分光度前必须用空白样调零等等。