实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法

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1、实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定1、实验目的掌握总糖和还原糖含量的测定方法学习总糖和还原糖提取的方法2、实验重点和难点利用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的实验原理多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖3、实验原理3.1、还原糖的概念指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖多为非还原糖。葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，故它们都是还原糖。3.2、3,5-二硝基水杨酸比色法总糖的提取及双、多糖的酸水解

2、。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所

3、以在计算多糖含量时应乘以0.9。相对密度法折光法旋光法物理法3.3、糖含量测定方法化学法还原糖法碘量法比色法直接滴定法(改良的兰—爱农法）高锰酸钾法萨氏法3，5—二硝基水杨酸酚—硫酸法蒽酮法半胱氨酸—咔唑法纸色谱薄层色谱GCHPLCβ—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖葡萄糖氧化酶测葡萄糖发酵法——测不可发酵糖重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素色谱法酶法4、操作步骤4.1、制定标准曲线管号012345标准葡萄糖溶液/mL00.20.40.60.81.0蒸馏水/mL1.00.80.60.40.20DNS试剂/mL

4、2.02.02.02.02.02.0沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水/mL9.09.09.09.09.09.0葡萄糖浓度/mg/mL00.20.40.60.81.0A5404.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取(1)还原糖：30mL水冲研钵2-3次1g土豆研成匀浆3mL水三角瓶中50℃水浴0.5h冷却定到100mL混匀,过滤取滤液作为还原糖提取液(2)总糖：1g土豆研成匀浆3mL水三角瓶中沸水浴0.5h冷却,用NaOH中和,加水定容到100mL混匀,过滤取滤液作为总糖提取液12m

5、L水冲研钵2-3次10mL6MHClI2-KI检测4.3、用3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、总糖含量管号空白对照还原糖样液管总糖样液管样液/mL01.01.0水1.000DNS试剂/mL2.02.02.0沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水/mL9.09.09.0A5405、数据处理与问题5.1、计算浓度5.2、本实验的注意事项？预习实验102.1酵母醇脱氢酶的提纯3,5-二硝基水杨酸法标准曲线