网织红细胞及相关参数.pdf

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1、TM库尔特GEN•S网织红细胞及相关参数自动化计数网织红细胞网织红细胞计数是用作红细胞产生或红细胞生成的指标，是诊断或监测贫血治疗最常用的临床指标。流式细胞术测量网织红细胞不但大大提高了网织红细胞计数的准确性和精确性，还能提供一些反映网织红细胞成熟度和大小的非传统参数。临床研究已经开始将这些非传统参数应用于许多贫血性疾病的诊断和治疗。传统的手工计数网织红细胞的方法因其固有的不精确性，当用做监测实验时有一定的局限性，尤其是用在计数范围的低限或高限时。涂片厚薄，染色深浅，有限的细胞计数以及技师间的差异均会导致结果的变异

2、系数为25%到50%。近年来，许多中、高档常规血液分析仪都配有自动的网织红细胞分析功能。网织红细胞测定已经从上机前需要预处理的方法发展到第二代血液分析仪，即自动吸样、处理和分析网织红细胞。网织红细胞分析过程的全自动化消除了手工涂片、染色和不同技师引起的偏差，可使实验更标准化。此外，同手工方法计数1000个细胞比，自动的网织红细胞分析法分析30000个细胞，大大提高了精确性和重复性。贝克曼-库尔特网织红细胞检测技术试剂贝克曼-库尔特网织红细胞分析采用一种非荧光染料---新亚甲蓝来沉淀网织红细胞内的RNA。网织红细胞染

3、色是为了把网织红细胞与成熟红细胞区分开来。血液与新亚甲蓝混匀孵育一段时间后，加入一种酸性、低渗的脱蛋白溶液，这种溶液能将网织红细胞内的血红蛋白除去，而保留着色的RNA。脱蛋白溶液的作用1有两个：红细胞内的血红蛋白漏出和红细胞肿胀成球形但不胀破。不规则形的成熟红细胞和网织红细胞受到0度到90度角的激光照射时会产生无法预料的光散射。球形红细胞能够产生可重复的光散射，这是确定标本中网织红细胞的基础。因此，脱蛋白溶液还具有固定特性使得红细胞肿胀后保持球形。必需清除球形红细胞内的血红蛋白，因为血红蛋白减少后可提高网织素的确定

4、，进而提高网织红细胞的确定。VCS技术细胞经染色和脱蛋白后，VCS技术采用一种独特的流式细胞术计数细胞并将网织红细胞分类，即同时采用体积、传导性和光散射三维分析来确定细胞并将其分类。直流电测量的体积确定细胞的大小。网织红细胞分析高度依赖细胞的大小信息，根据定义，未成熟的红细胞大于成熟的红细胞。数据图的y轴为体积。传导性或射频测量提供细胞的内部特性信息。数据图的z轴为传导性，它只能在旋转的三维图中才可看到。细胞通过氦-氖激光束测得的光散射提供细胞表面特性和细胞颗粒特性的信息。网织红细胞分析高度依赖光散射信息因为含有残

5、余RNA的红细胞的光散射强于成熟红细胞的光散射。数据图的x轴为光散射。数据图和柔变轮廓分析从体积、传导性和光散射收集的原始资料绘在三维数据图上。用曲线分离细胞群后，血小板和白细胞被分离出去，只留下成熟红细胞和网织红细胞作进一步分析。柔变轮廓分析以一种非线性的方式将网织红细胞从成熟红细胞中分离开来，这种非线性方式是沿着细胞群的曲线而不是直线。网织红细胞报警2利用复杂的默认值，位置参数与其他细胞群的统计学结合起来保证结果的完整性并引发网织红细胞报警。某些临床疾病会导致数据图与已知的成熟红细胞和网织红细胞群不符。这些不典

6、型的细胞群引发出确认网织红细胞或异常网织红细胞群信号来提示实验室需要进一步查看。文后列出了所有网织红细胞的报警、代码和信号。异常网织红细胞群信号在以柔变轮廓分析红细胞的过程中，可观察到一个有强光散射的细胞亚群的体积均值比网织红细胞更接近于成熟红细胞。这群细胞与地中海贫血中常见的未完全溶血（淡影）的红细胞的强光散射特性一致。因疾病的异源性和病人的状况不同这个细胞群可能不明显或非常显著。红细胞形状和大小多变的镰状细胞标本中的网织红细胞和成熟红细胞的体积均值和标准差均升高。因疾病的异源性和病人的状况不同这个细胞群可能不明

7、显或非常显著。在数据图的绘制过程中，可观察到一个大体积的细胞亚群之光散射均值比网织红细胞更接近白细胞。已经发现这群细胞是小体积白细胞群的延续，可能是碎片或破碎的白细胞。网织红细胞的相关参数贝克曼-库尔特通过自动的网织红细胞分析和流式细胞术测量光散射为网织红细胞群提供了更多的细节。网织红细胞群可进一步被分成10个成熟度。含有最多RNA的网织红细胞位于最强光散射区，三到十区。此外，VCS技术测量网织红细胞还可得出以下参数：网织红细胞百分比（RET%）和网织红细胞绝对值（RET#），未成熟网织红细胞指数（IRF），平均网

8、织红细胞体积（MRV），平均球形细胞体积（MSCV），和强光散射网织红细胞参数（HLR%和#）。3下表列出了库尔特GEN•S血液分析系统可给出的网织红细胞参数。值得注意的是采用不同的技术进行网织红细胞分析时其参考范围会差别很大。尽管所有制造商的目标都是确定网织红细胞和未成熟网织红细胞亚群，但是方法学和默认值有很大差异。建议每个实验室建立自己的参考范围。参数计