产后奶牛子宫内大肠杆菌的分离和血清型鉴定.pdf

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1、·104·AnimalHusbandry＆VeterinaryMedicine2015Vol.47No.3氈欀欀欀欀欀氈欀欀欀欀疾病欀产后奶牛子宫内大肠杆菌的分离和血清型鉴定欀欀欀防治欀欀氈欀欀欀欀欀氈杭苏琴，王一昊，郑婕，闵江涛，丁立人，朱伟云(南京农业大学动物消化道微生物实验室，江苏南京210095)摘要:分析产后健康和子宫内膜炎奶牛子宫内大肠杆菌的分布和血清型与患病之间的关系。选取产后21～30d的健康奶牛25头和子宫内膜炎奶牛35头，采集子宫黏液，常规方法对分离的菌株进行生化鉴定和O抗原血清型分型。结果显示，60头奶

2、牛中43头(71.67%)分离到145株大肠杆菌，61株来自18头健康牛，84株来自患子宫内膜炎奶牛，说明大肠杆菌在产后21～30d奶牛子宫内的分离率较高。血清学分型发现，96株菌分属于不同的15种血清型，3株发生自溶，46株未能确定，87.5%(84株)的菌株属于7种常见血清型，即O2、O5、O26、O44、O73、O86和O111，而O111(41.84%)和O44(27.55%)是最为集中的两种类型，O2，O8、O55和O86仅出现在患病奶牛中，O114、O126、O141仅出现在健康奶牛中。说明一些特异性的血清型可能

3、与患病有关。关键词:奶牛;产后;子宫黏液;大肠杆菌;血清型中图分类号:S858.23文献标志码:B文章编号:0529－5130(2015)03－0104－03产后奶牛子宫内膜炎是奶牛生产中最为常见的繁混有灰白色组织块，恶臭等特征，部分奶牛尾根部有殖疾病，极易导致子宫复旧延迟、产犊间隔延长和不黏液或干燥的黏性物质。产后健康奶牛，直肠触诊能［1］孕的发生，严重影响奶业的经济效益。产后20d感觉到有较大的子宫腔，子宫内无水样液体，子宫颈［1，4］通常是奶牛子宫排出恶露和复旧的时期，45～60d有弹性，外阴无黏性分泌物。［2］1.2

4、培养基的制备恢复正常发情和配种。研究表明，细菌入侵子宫是诱发奶牛子宫内膜炎的主要因素，90%奶牛产后子营养肉汤培养基、麦康凯琼脂(含结晶紫)培宫内能分离到不同种类的细菌，尤其是大肠杆菌的分养基和伊红美蓝琼脂培养基(购自杭州天和微生物［1］试剂有限公司)均严格按照说明书配制。离率较高。子宫内大肠杆菌的出现，会造成子宫内环境的改变，为其它强致病菌如隐秘脓杆菌、坏死1.3子宫黏液中大肠杆菌的分离纯化梭杆菌等的入侵创造有利的条件［3］。目前对大肠杆取适量子宫黏液样品，生理盐水3倍和6倍稀释菌的研究主要集中于肠道疾病如腹泻和乳房炎等，

5、子后均匀涂布于麦康凯琼脂培养基表面，37℃培养约16～24h。挑取生长良好的砖红色圆形凸起菌落，每宫内膜炎大肠杆菌的研究还较少，血清型的研究更［5］个样品挑取1～4个单菌落，用三区划线法将单菌少。本研究通过采集健康和子宫内膜炎奶牛产后21～30d子宫黏液，分析子宫内大肠杆菌的分布和生落划线于伊红美蓝琼脂培养基表面，再于37℃培养约16～24h，选取生长良好的带金属光泽的单菌落进化鉴定类型，确定产后子宫内膜炎奶牛致病性大肠杆行革兰氏染色镜检。菌血清型，为临床诊断和有针对性的治疗大肠杆菌引1.4大肠杆菌的氧化酶试验和生化鉴定起的

6、子宫内膜炎提供前期工作基础。将符合大肠杆菌形态特征，革兰氏染色为阴性的1材料与方法细菌接种于灭菌营养肉汤中，37℃培养16～24h。吸取适量菌液涂于氧化酶试纸一端，10～20s内观察1.1奶牛选择和子宫黏液采集结果，阳性为紫红色，阴性为无色或淡黄色。于江苏省某奶牛场，选择产后(25±5)d患子选取氧化酶试验阴性的菌株进行生化鉴定(所宫内膜炎奶牛35头和健康奶牛25头。类似人工输精用生化试剂均购于杭州天和微生物试剂有限公司)，的方法采集子宫黏液，冰盒保存，3～4h内带回实肠科GYZ－15e编码微量生化管包括:硫化氢、苯丙验室。

7、临床子宫内膜炎的判定标准为:子宫颈变硬、氨酸、葡萄糖酸盐、蛋白胨水(靛基质)、葡萄糖磷变粗，双侧子宫角基本对称或不对称，质地较硬，弹酸胨水、枸橼酸盐、尿素、半固体琼脂、葡萄糖产性降低，基本无大的子宫腔，阴道检查子宫颈外口有气、赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖、氨基酸对照、山梨不同程度的黏液性或脓性分泌物，棕红色或棕黄色并［4］醇、侧金盏花醇和木胶糖。取25μL菌液接种于上述微量生化管中，37℃培养，观察试验结果。收稿日期:2014－06－271.5奶牛子宫内大肠埃希氏菌O抗原定型基金项目:国家科技支撑计划(2011BAD1913B02

8、)作者简介:杭苏琴(1969－)，女，教授，博士，E-mail:suqin-根据大肠杆菌O抗原定型血清试剂盒说明书，hang69@njau.edu.cn采用玻板凝集反应和试管凝集反应，对初步分离、鉴畜牧与兽医2015年第47卷第3期·105·定为大肠杆菌的菌株进行血清学鉴定，参考李玲种血清