副猪嗜血杆菌的分离与血清型鉴定-论文.pdf

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1、第35卷第4期家畜生态学报Vo1．35NO．42014年4月ActaEcologiaeAnimalisDomasticiApr．2014副猪嗜血杆菌的分离与血清型鉴定于江～，吴家强，张玉玉，陶海英，王金宝。(1．山东师范大学生命科学学院，山东济南250014；2．山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东济南250100；3．山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100)[摘要]为了解副猪嗜血杆菌的血清型流行情况，采用细菌分离培养结合PCR的方法，对2008年至2012年，从山东、河南、河北、湖南、江苏、上海的多个猪场送检的186份疑似样

2、品进行副猪嗜血杆菌的检测，再通过琼脂扩散试验对分离菌株进行了血清型鉴定。结果表明，从186份疑似样品中最终分离鉴定到57株副猪嗜血杆菌，分离率为30．69／6。结果提示，我国副猪嗜血杆菌病存在不同程度的感染，以血清4型和5型最为流行，其次是血清1、12、13型，且该病的发生与季节和猪的日龄有关。[关键词]副猪嗜血杆菌；分离鉴定；血清学；调查[中图分类号]s811．6[文献标识码]A[文章编号]1005—5228(2014)04—0064—03副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，HPS)是比率最高。定居于健康猪的上呼吸道的常在菌

3、，但在特定条件下本研究采用细菌分离培养结合PCR检测的方可以侵入机体，引起发病猪的多发性浆膜炎、关节炎、法，对2008年至2012年送检的来自山东、河南、河脑膜炎等疾病口]。近年来，随着我国养猪业规模化和北、湖南、江苏、上海的多个猪场的186份样品进行集约化发展，该病以继发的方式存在于各规模化猪HPS的分离鉴定，用琼脂扩散试验对分离菌株的血场，并呈逐年上升趋势，增加了断奶到保育阶段仔猪清型进行鉴定，分析该病的发生与季节和猪日龄的的发病率及死亡率，对养猪业造成巨大的经济损失，关系，以了解副猪嗜血杆菌病的流行情况，为该病的已逐渐成为世界范围的重要疾

4、病_2]。综合防控及治疗提供参考依据。HPS的血清型复杂多样，按Kieletein—Rapp—1材料与方法Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法，至少可将副猪嗜血杆菌分为15个血清型。蔡旭旺等]1．1样品来源研究表明我国以血清4型(24．29／6)和5型(19．29／6)从2008年至2012年，于山东、河南、河北、湖最为流行，其次为13型(12．5％)，14型(7．1％)和南、江苏、上海的多个猪场采集鼻拭子及发病猪场的12型(6．8)，另外有12．1Vo的分离菌株不能进行疑似病例(包括发病猪、病死猪或发病猪的脑、肺脏、血清学分型j

5、。关节、心脏)，共186份。近几年，HPS在我国各地猪场引起多发性浆膜1．2主要试剂与仪器炎和关节炎的报道屡见不鲜，已从不同地区分离出HPS标准阳性血清：由山东省农业科学院畜牧该菌，损失相当惨重]。臧莹安等对广东省部分兽医研究所保存、提供；胰蛋白胨大豆琼脂培养基猪场进行了HPS流行病学调查，结果表明不同猪场(TSA)为美国BD公司产品；烟酰胺腺嘌呤二核苷感染HPS的阳性率是不同的。白刚等[7对宁夏四酸(NAD)为Sigma公司产品；新生牛血清购自济南个地区未接种HPS疫苗猪场的403份猪血清进行劲牛公司；TaqDNA聚合酶、dNTP、DNAMa

6、rker了HPS的血清抗体检测，结果发现宁夏不同地区流DL2000购自大连宝生物工程有限公司。恒温培养行情况各有差异，且4～1O周龄的仔猪感染HPS的箱购自上海精宏实验设备有限公司；PTC一2000型[收稿日期]201310—12，修回日期：2013-10—25[基金项目]山东省现代农业产业技术体系；山东省博士后研究基金(201102009)[作者简介]于江(1985)，女，山东莱州人，在读博士，主要从事动物微生物与免疫学研究。E—mail：yujiang_2213@163．corn*[通讯作者]王金宝(1962一)，男，山东昌邑人，教授，博士

7、生导师，研究方向：动物病毒学与免疫学。E—mail：wangjb@saas．ac．cn66家畜生态学报第35卷阳性数Positivenumber23i0731O06阳性率Positiverate／3．55．317．512．35．31．8OO3．517．522．810．52．5不同日龄猪HPS感染情况统计57份HPS阳性的样品的日龄，其中0～参考文献：30日龄有18例，31～50日龄有28例，51～8O日龄[1]OliveiraS，P~oanC．Haemophilusparasuis：newtrendson有8例，81日龄以上有3例。可以看出，H

8、PS主要dignosis，epidemiologyandcontrol[J]．VeterinaryMicrobiolo—感染保育舍的31~50日龄(即