大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

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1、青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目：大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定姓名：学院：动物科技学院班级：马业科学1201班学号：2012任课教师：温建新二0一四年四月一日大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定马业科学1201任课教师温建新摘要：为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。关键词：大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦康凯琼脂引言：大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不同的血清型。自然界中大肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病

2、性大肠杆菌的数量有限。沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。目录摘要I关键词I引言I1材料11.1菌种11.2培养基11.3生化试剂11.4沙门氏菌诊断血清11.5器材12方法12.1增菌培养12.2直接分离

3、培养12.3形态观察12.4培养特性观察12.5生化试验22.5.1糖发酵管接种22.5.2蛋白胨水接种22.5.3葡萄糖蛋白胨水接种22.5.4尿素琼脂接种22.5.5枸橼酸盐琼脂接种22.6生化特性的观察22.6.1糖发酵实验22.6.2MR实验22.6.3VP实验22.6.4吲哚实验32.6.5枸橼酸盐利用实验32.6.6硫化氢实验32.7药物敏感试验-扩散法33结果观察33.1大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况33.2细菌的染色、镜检43.3生化管的接种培养43.4吲哚、MR、V-P实验53.5药物敏感试验604结论7参考文献7

4、71材料1.1菌种大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液1.2培养基普通培养基:肉汤、普通琼脂、半固体培养基。鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。生化鉴别基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。1.3生化试剂MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等。1.4沙门氏菌诊断血清A~E群多价O血清及单因子血清。1.5器材革兰氏染液、显微镜、吸管等。2方法2.1增菌培养用无菌刻度吸管吸取大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液2ml，分别加入已有亚砷酸盐量绿增菌液100ml的试管和四磺酸钠增菌液10ml的试管个1ml.

5、接种后轻轻混匀，置37摄氏度温箱内培养18-24h。2.2直接分离培养2.3形态观察以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的大肠杆菌和沙门氏菌单个菌落，在在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。观察两种细菌的形态，大小与排列方式并做比较。这两种都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不显著。2.4培养特性观察将大肠杆菌和沙门氏菌的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。置37摄氏度温箱内培养24h后，取出观察两种细菌

6、的培养特性并比较。72.5生化试验生化实验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不被污染杂菌。检查方法同一般培养物的制片、染色、镜检。镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态也染色特性菌须符合该种菌种的特性。凡污染杂菌者，此菌种不可用。2.5.1糖发酵管接种每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反应管，每种唐一管，穿刺接种。后置于37℃温箱培养2-3d。2.5.2蛋白胨水接种每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚实验。后置于37℃温箱培养2-3d。2.5.3葡萄糖蛋白胨水接种每种菌纯培养物接种两管，培养后一管作MR实验，

7、另一管作VP实验。后置于37℃温箱培养2-3d。2.5.4尿素琼脂接种每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。后置于37℃温箱培养数小时。2.5.5枸橼酸盐琼脂接种每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。后置于37℃温箱培养2-3d。2.6生化特性的观察2.6.1糖发酵实验取经2-3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变为黄色的，表示该菌发酵此糖产酸气；凡凡培养基不变色的，表示该菌不发酵此糖。2.6.2MR实验取一支经2-3d培养后的葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入MR试剂数滴，凡液体呈红色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应，橙黄色者为可疑反应。2.6

8、.3VP实验取另一支葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入VP试剂3ml，再加入VP试剂乙液1ml，充分摇匀后静置与