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1、鸡大肠杆菌的分离与鉴定摘要：**i]j•某鸡场5600只240日龄罗曼蛋鸡陆续发病，产蛋率迅速下降，病死率约为6%。病鸡多呈精神沉郁、食欲减退，腹部膨大，粪便呈灰绿色或黄色，多经2〜3周死亡，初步诊断为人肠杆菌病。采集2只病鸡的肝和卵巢，通过细菌的分离培养，获得2株革兰氏阴性杆菌。糖发酵试验、三糖铁琼脂试验、尿素分解试验、硫化氢产生试验、药敏试验、IMV1C试验确定其为大肠杆菌。玻板凝集试验鉴定其0抗原型为02；选用10种临床常用的抗菌药进行药敏试验，结果表明分离菌株对先锋V、多粘菌索、味喃妥因敏感，而对四环素、林可霉索耐药。关键词：鸡，大肠杆菌病，分离，鉴定论文试验鸡大
2、肠杆菌病是由某些血清型的致病性大肠埃希氏菌引起的鸡的非肠道传染性疾病的总称。尽管近儿年养鸡业发展迅速，但随着规模养殖的不断增加和产品流通的日益频繁，鸡人肠杆菌病越来越普遍，已经成为影响养鸡业快速发展的主耍疫病之一。通过对大肠杆菌的分离、鉴定，对该病有着非常重要的意义。通过药敏试验测定大肠杆菌对药物的敏感，可为合理用药提供指导。本论文通过微生物学方法，对**市某鸡场罗曼蛋鸡的疑似大肠杆菌病进行了确诊。1材料1.1病料来源2008年3月17口，**市某鸡场5600只240口龄罗曼蛋鸡陆续发病，产蛋率迅速下降，病死率约为6%。病鸡多呈精神沉郁、食欲减退，腹部膨大，粪便呈灰绿色或
3、黄色，多经2飞周死亡。采集2只病鸡的肝和卵巢作为病料。1.2培养基1.2.1麦康凯琼脂（Mackonkeyagar,蛋白月东20g,乳糖10g,氯化钠5g,牛胆盐5g,中性红0.025g,琼脂粉20g,加蒸憾水lOOOmL,pH7.3）。1.2.2三糖铁琼脂（蛋白月东20g,牛肉浸膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖lg,氯化钠5g,硫代硫酸钠0.2g,硫酸亚铁0.2g,琼脂粉20g,0.4%酚红水溶液6.3mL,蒸憾水1000mL,除酚红指示剂外，各成分加热溶解，调至pH7.4,然后加入酚红指示剂，分装丁试管;115°C高压蒸气灭菌15min后，制成底层较深的斜面）。
4、1.2.3胰蛋白腺水溶液（蛋白腺2・5g,氯化钠1.25g,蒸憾水250mL,溶解后调pH为7.6,分装于试管，每管4~5mL,121°C高压蒸气灭菌15min）«1.2.4葡萄糖蛋白腺水溶液（每100mLpH7.6的邓亨氏蛋白豚水屮加入葡萄糖lg,溶解后分装于试管，每管ImL,121°C高压蒸气灭菌15min）。1.3试剂1.3.1M-R试剂（先将甲基红0.02g用95%酒精60mL溶解后，再加入蒸馆水至100mL）o1.3.2V-P试剂（甲液为5%Q蔡酚酒精溶液，乙液为40%的氢氧化钾水溶液，将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4~10°C保存）。1.3.3革兰氏染色液（1）
5、草酸钱结晶紫染液（A液：结晶紫2g,95%乙5?20mL；B液：草酸钱lg,蒸憾水lOOmLo将结晶紫研细后，加入95%酒精，使Z溶解，配成A液；将草酸钱溶于蒸憾水，配成B液。两液混合即成）；（2）革兰氏碘液（碘片lg,碘化钾2g,蒸饴水300n）L,先将碘化钾溶解于少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全部溶解后，加足水份即成）；（3）95%的乙醇溶液（4）复红染液（将2.5g复红溶解于lOOmL酒精；取配好的复红酒精溶液10mL与80mL蒸憾水混合均匀即成）。1.4药敏试纸庆大霉素、多粘菌素、四环素、先锋V、咲喃妥因、环丙沙星、林可霉素、新霉素、罗红霉素等购自北京
6、天坛生物制品公司。1.5生化发酵管包括：葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、尿素、硫化氢、枸椽酸盐等微量生化发酵管，为杭州天和微生物试剂有限公司生产。1.6实验仪器（1）天平：HAnGPINGJA2003（2）压力蒸汽灭菌器：上海华线医用核子仪器有限公司（3）无菌超净台：苏州金燕净化设备厂（4）离心机:TGL-16G,上海安亭科学仪器厂（5）细菌微量生化反应器：杭州天和微生物技术开发公司（6）-K他实验室常用仪器（接种环、移液器等）:**区动物疫病预防控制屮心2方法1.1病料的采集取发病鸡2只，按照无菌操作技术打开腹腔，采集肝脏和卵巢作为病料。2.2细菌的分离取采集的肝和
7、卵巢病料，划线接种于麦康凯平板；所有接种工作均采用严格无菌操作，在无菌超净台内完成。2.3细菌的纯培养挑取可疑细菌的典型菌落接种在麦康凯平板上，37°C需氧培养24h后，再挑取粉红色单个菌落再在麦康凯培养基上再进行分区划线，37°C培养24h。连续纯培养3代，得到细菌的纯培养物，同时进行革兰氏染色镜检。2.4革兰氏染色镜检1.4.1用接种环挑取一环生理盐水蘸于洁净玻片上，再用接种环挑取少量纯培养的细菌与玻片上的生理盐水混合，并均匀涂布于玻片上，自然干燥。2.4.2在玻片上滴加草酸钱结晶紫染色液，作用l~3min,水洗。1.4.
