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1、鸡大肠杆菌的分离和鉴定及耐药性监测［中图分类号］S831［文献标识码］A［文章编号］1003-1650(2013)05-0205-01鸡大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的一种常见疾病。包括大肠杆菌性腹膜炎，输卵管炎，滑膜炎，脐炎，气囊炎，肉芽肿，炎和其他疾病，大肠杆菌到处是广泛存在于自然坏境屮，因此，形成一个鸡威胁整个过程，对家禽业的重大损失。人肠杆菌血清型，対当地流行菌株和不同血清型，同时，随着抗生素的广泛使用，并在强大肠杆菌的耐药性，为临床合理用药,我们确定了滑县境内的大肠杆菌菌株，大型养鸡场，并在此基础上对笏物耐药性的监测。一、材料1.病料病禽的粪便或
2、泄殖腔棉拭子，2009年10月采自滑县某鸡场2•培养基普通肉汤，普通营养琼脂，试剂，生化反应培养基等按《现代微生物培养基和试剂手册》配制。伊红美蓝琼脂(EMB),Mueller和hintion琼脂(MH),北京陆桥商检新技术公司生产，批号分别为：005027,NCCLS(nationalcommittee1aboratorystandards美国临床实验室标准化委员会)法规颁布的专用培养基。3.实验动物18~22g昆明系小口鼠，购于河南省实验动物中心4.药敏纸片河南科技有限公司生产，批号：091023,NCCLS规定的厚纸片，直径6.25mm,分为10
3、种：氨节西林(AMP),哌拉西林(PIP),青霉素G(PG),卡那霉素(Kan),诺氟沙星(也不)，完成了由湍流(T0B),头抱哌酮(CFP),庆大霉素(GEN),氯霉素(CMP),阿米卡星(AKN)o二、方法1•菌株的分离与鉴定1.1菌株的分离和培养方法：新鲜粪便或泄殖腔棉拭子，接种肉汤，37°C18〜24h划线接种于EMB平板，经过37°C18-24小时后可疑菌落,进行革兰染色镜检。上述培养特性和形态，染色反应，与人肠杆菌菌株在普通营养琼脂斜面上纯粹的增长保持一致，生化鉴定。1.2致病性试验将上述生化反应已鉴定为大肠杆菌的菌株接种于普通肉汤，用37
4、°C18h的肉汤培养物，分别腹腔接种18~22g的小白鼠，200ul/只，观察存活情况。2.耐药监测分离后的大肠杆菌18株，采用Kriby-Bauer(K-B法)进行耐药性监测方法，NCCLS纸片扩散法和发布我的药敏试验。菌株接到栅斜面上，37°C18小时，用牛理盐水冲洗草坪。细菌数量稀释0.5麦斯威尔比浊管。对5x107-108CFU/mL等效CFU/mL,MH10厘米直径的培养皿琼脂倾注了厚4毫米MH琼脂平板，15雨用无菌棉签蘸菌液浓度，管的内壁将经过3次是多余的菌液挤在琼脂表面涂层。60每一个旋转。最后，沿板边涂抹一周。3〜5分钟后在室温下干燥。
5、无菌银子使用药物的琼脂盘中心表面，距离应大于24毫米。从盘面边缘板应大于15mill,35°C16~18小时阅读结果，记录各纸片的抑菌圈直径.三、结果1•菌株的分离与鉴定大肠杆菌菌株L8分离，黑人在伊红美蓝琼脂金属光泽的菌落形成的革兰氏阴性杆菌，两端钝，单或双。该菌能发酵葡萄糖，乳糖，麦芽糖，甘露糖醇，蔗糖的酸气，发酵几株，酸或酸气；MR阳性试验；V负P试验;生产卩引味;尿素酶试验阴性;硝酸盐还原试验阳性;□引味试验阳性；枸椽酸盐利用试验阴性；糖铁坡三酸，黄底黑现象，无气。1.致病性试验18株大肠杆菌接种到小鼠18-22Go只有4在24小时内死亡，其余
6、的生活。2.抑菌圈直径的耐药性监测结果见表1。表1耐药性监测抑菌圈直径结果mm注：-无抑菌圈3.按NCCLS法规判定的耐药性监测试验结果见表2。表2耐药性监测试验结果统计％四、讨论1•的分离和鉴定，分离的18株大肠杆菌，4株致病性大肠杆菌，占22.22%OL株死于禽疾病，1株发病死亡，2株从健康的鸟。分布的农场仍然致病性大肠杆菌。局部免疫性较高的鸟只有承运人可以不表现症状，但是可以直接传送到其他家的鸟，引起的死亡的发生率，应注意及时消毒工作。2.药敏试验结果可以看出，大肠杆菌敏感率的主要药物比哌拉西林，环丙沙星，庆大霉素，丁胺卡那霉素，妥布霉素，丁胺卡
7、那霉素60%,头砲哌酮药物敏感率可以达到90%以上，为有效预防和控制大肠杆菌病有一定的参考价值。3•种血清型的人肠杆菌？许多农场，药物是不一样的。在耐药监测我们的氨节青需素的耐药率为43.67%，卡那霉素的耐药率为40%,氯霉素抗性是13.33%,这表明抗生素的长期使用单一药物耐夯的主要原因。因此,在临床耐药监测应定期进行，选择几个敏感药物交替使用，能收到较好的
