猪肝脏大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

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1、猪肝脏大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案(2011-06-2718:19:02)标签：分类：工作学习杂谈实验原理：1、犬肠杆菌的性质：大肠杆菌是G—无芽砲直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、山露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。MR试验，删味试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用枸椽酸盐。半固体中沿穿刺线向四周生长。2、沙门氏杆菌的性质:沙门氏杆菌是G宜杆菌。

2、在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面卜•层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产牛H$。能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产卿味，不分解尿素。实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜而培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒梢灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结品紫、碘液、酸洒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序:一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌

3、培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。（2）川浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。（3）川接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中,37°C恒温培养24小时。菌种大肠杆菌菌落：革兰氏染色:三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C恒温培养24小时。（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基,

4、染色镜检,看是否有疑似沙门氏菌,有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上（葡•萄糖、乳糊、麦芽糖、甘露醇、蔗糊、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H$）,并做穿刺实验于三糖铁上。37°C恒温培养24小吋后观察结果。若实验结果满足预期效果，则可判定为大肠杆菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。（2）检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌，染色镜检，看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种

5、于生化培养基上，并作穿刺实验于三糖铁上，37°C恒温培养24小时后观察结果，若结果满足于沙门氏菌的牛化特性，则可判定为沙门氏菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。实验的预期效果：主耍牛物学特性和牛化特性沙门氏菌菌落：革兰氏染色:菌体形态:糖发酵葡萄糖麦芽糖蔗糖乳糖生化实肌醇M.RV.P枸椽酸盐验二糖铁琼脂斜面变化:菌体形态:糖发酵葡萄糖麦芽糖蔗糖乳糖生化实肌醇M.RV.P枸椽酸盐验三糖铁琼脂斜而变化：（0表示产酸，Q表示产酸又产气）菌种主要生物学特性和生化特性大肠杆菌落：菌革兰氏染色：菌体形态糖发酵葡萄糖麦芽糖蔗糖乳

6、糖生化实肌醇M.RV.P枸椽酸盐验三糖铁琼脂斜面变化:沙门氏菌落：菌革兰氏染色：菌体形态：糖发酵葡萄糖麦芽糖蔗糖乳糖生化实肌醇M.RV.P枸椽酸盐验三糖铁琼脂斜血变化：实验记录：时间人员安排:附1.【1】亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）（1）原料蛋白腺5g乳糖4g亚硒酸氢钠4g磷酸氢二钠5.5g磷酸二氢钾4.5gL—胱氨酸0.Olg蒸绸水1000ml（2）制法称取L—胱氨酸0.lg（或DL—胱氨酸0.2g）加4%氢氧化钠1.5ml,使其溶解，再加入蒸镭水&5ml即成1%L—胱氨酸氢氧化钠溶液。将除亚硒酸钠和L-胱氨酸以外的各

7、成分溶解丁-900ml蒸係水中，加热煮沸，待冷却后，以无菌操作与上液混合，最后加入1%L—胱氨酸氢氧化钠溶液lml,分装于灭菌瓶中，每瓶100ml,PH应为7.0±0.1。（3）用途：用于沙门氏菌增菌培养。【2】麦康凯培养基（1）原料琼脂1.5—2g胆盐0.5g蛋白豚2g1%中性红溶液0.5ml氯化钠0.5g蒸係水100ml纯乳糖lg⑵制法①将琼脂加于50ml蒸係水中,加热溶解作为甲液。②另将蛋白豚、乳糖、氯化钠、胆盐置于50ml蒸馅水中，在水浴中加热溶解,作为乙液。③将甲、乙两液混合矫1EPH至7.4,然后用脱脂棉过滤

8、。④分装于三角瓶中，每瓶100ml,高压蒸气灭菌15mino⑤待冷至65度时每100ml甲、乙液中加入1%中性红溶液0.5ml。⑥摇匀后即可将其倾入无菌平皿内，制成平板待用。⑦用途：分离沙门氏菌及志贺氏菌属细菌时用。备注:此培养基可利用乳糖的发酵來鉴別肠道致病性革兰氏阴性细#（，此原理同S.S琼脂平板，但其对大肠杆菌