猪源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究

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1、分类号：S852.6单位代码：10193密级：公开学号：2012649硕士学位论文猪源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究InsightsintoPrevalenceofAntimicrobialResistanceandResistanceGenesinEscherichiacoliIsolatesfromswine作者姓名：王基伟学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物疫病病原学指导教师：冯书章研究员所在学院：动物科学技术学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文

2、中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复

3、制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要伴随着现代化养殖模式的兴起，在畜牧生产中抗生素的合理使用越来越受到重视。抗生素可用于治疗和预防疾病、提高饲料转化率和促进动物生长。尽管抗生素在实践应用中取得了良好的效果，但是多重耐药菌也随之出现并给感染治疗带来更多困难。大

4、肠杆菌是重要的肠道共生菌，对维持肠道的平衡起到了重要作用。在养猪业中抗生素滥用情况严重，这使得猪源大肠杆菌耐药形势日趋严峻。猪源大肠杆菌已成为重要的耐药细菌贮存库，它极有可能通过环境污染、直接接触或食物链将耐药菌传染给人类，因此检测猪源大肠杆菌的耐药性并探讨其公共卫生意义十分必要。本研究于2013年在吉林省采集318份猪源样品，分别来源于临床健康猪、腹泻仔猪以及市售猪肉，共分离鉴定大肠杆菌275株。以氨苄西林、头孢噻肟等15种药物进行了药物敏感性实验，并以多重PCR方法进行系统进化分群。结果表明，健康猪样品大肠杆菌分离株主要分属A群和B1群，为非致病群；腹泻仔猪大肠杆菌分离株B2和

5、D群的比例显著高于健康猪大肠杆菌。综合分析，大肠杆菌分离株对四环素、氨苄西林和磺胺甲基异恶唑耐药最严重，其中176株菌表现为对3类以上抗生素的多重耐药，全部菌株对美洛培南、多粘菌素敏感。从仔猪腹泻样品分离的大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素、四环素、氯霉素及磺胺甲基异恶唑的耐药率显著高于健康猪和猪肉样品分离株的耐药率。针对具有较高耐药率的猪源大肠杆菌检测其耐药基因，探讨其分子遗传基础以及分子流行病学规律。采用PCR方法检测CTX-M、TEM、SHV等3种ESBLs的基因和tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(M)、tet(W)等6种四环素耐药基因

6、。结果显示275株大肠杆菌中，116株检出TEM-1基因，该基因型为主要流行基因型；tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(M)耐药基因的检出率分别为64%、22%、1%、5%，tet(A)/tet(B)为主要流行基因型。采用质粒接合转导实验探究了质粒在多重耐药大肠杆菌耐药性水平传播中的作用。随机选取50株猪源多重耐药大肠杆菌为供体菌，用氨苄西林，四环素等12种抗生素对接合子进行药敏试验，多重PCR方法进行质粒分型。结果显示，50株供体菌中，18株接合转导成功，接合转导率达36%。与接合子耐药谱分析结果表明，存在多种耐药性共转移的现象。18株接合子获得质粒复制子分型以FI

7、B为主。研究表明，接合转导型耐药质粒在猪源细菌耐药性传播中起到重要作用。本研究获得了猪源大肠杆菌耐药性的基本流行病学数据，探讨了多重耐药性水平传播的分子遗传学机制，为指导养殖业的临床用药及耐药性监测提供科学依据。关键词：猪，大肠杆菌，耐药性，水平转移AbstractWiththedevelopmentofmodernbreeding，antimicrobialuse(AMU)isbecomingessentialtofoodanimalproduction.Antim