鸡大肠杆菌血清型鉴定及药敏试验

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1、鸡大肠杆菌血清型鉴定及药敏试验鸡大肠杆菌血清型鉴定与药敏试验(新科学院生物工程系生物技术091班)绪论鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avianpathgenicityE.coli,APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病。本病目前呈世界性分布，国内各地的鸡群普遍存在感染并常有发病。该病的特征是病型多，包括急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、眼炎、关节炎、脐炎、肉芽肿以及肺炎等,最常见的为气囊炎、输卵管炎［1,2］o在临床上往往不单独发病，一般继发于一些病毒性感染如新城疫、马立克氏病、传染性支气管炎等。现有的研究表明，APEC抗原性复杂、血清型

2、多样，不同类型之间和不同地区之间致病菌的血清型差别很大［引。鸡大肠杆菌病一年四季均可发生，各品种和各年龄的鸡均可感染，若不及时采取冇效的防治措施，便会导致大量死亡。大肠杆菌易产生耐药性，用药物控制该病不但费用高、效果不佳，且会造成药物残留和降低产品品质，为此，有效防治该病就显得尤为重要。木研究对新乡地区某鸡群发生的疑似鸡大肠杆菌病进行了初步诊断，并采集典型病料进行病原菌的血清型鉴定和药敏试验,取得了理想效果，为该病的确切诊断和有效防治提供了可靠依据。现将有关情况报告如下：1材料与方法1.1病料来源对来自新乡市一养鸡厂疑似鸡大肠杆菌病的病例进行临床初步诊断[4],病鸡表现为精神

3、委顿，羽毛松乱，食欲废绝，拉黄白稀粪。用灭菌棉接触采集病鸡粪便作为病料。（材料由动科学院提供）1.2主要试剂草酸镀结晶紫（天津市博迪化工有限公司）碘液、氯化钠（北京中联化工试剂厂）牛肉浸粉、蛋白月东（北京奥博星生物技术有限公司）195%酒精（天津市天力化学试剂有限公司）番红（天津市瑞金特化学品有限公司）葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖等微量发酵管（杭州天河微生物试剂有限公司）葡萄糖、乳糖、猪胆盐、中性红（郑州派尼化工试剂厂）营养琼脂（上海光星生物技术有限公司）甲基红试剂、卩引卩朵试剂、VP指示剂（天津市瑞金特化学品冇限公司）磷酸氢二钾、生理盐水、伊红、美兰、石碳酸、乙醯（广西汕头市

4、西龙化工厂）标准麦氏比浊管（北京红娃数字机电技术有限公司）1.3培养基营养肉汤培养基麦康凯培养基伊红美兰培养基蛋白腺水营养琼脂培养基1.3.1培养基的制备⑸营养肉汤培养基蛋白月东10g,牛肉浸粉3g,氯化钠5g,蒸惚水1000ml称取蛋口月东5g,量取蒸谓水1000ml,将牛肉浸粉倒入，边加热边搅拌，沸腾后停止加热，调pH至7.0-7.4,分装到试管屮，加塞后在压力为O.llMpa,温度为121°C条件下灭菌15分钟。备用。麦康凯培养基蛋白月东20目乳糖10已猪胆盐5目氯化钠5g,0.5%中性红水溶液5mL,0.01%结晶紫水溶液10mL,琼脂17g,蒸憾水1000ml将蛋白

5、月东、猪胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馆水中，校正pH7・2。将琼脂加入600mL蒸憾水中加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121°C高压灭菌15min0备用。临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50〜55°C时，加入结晶紫和屮性红水溶液，摇匀后倾注平板。伊红美兰培养基蛋白月东乳糖10已磷酸氢二钾2g,琼脂20g,2%伊红水溶液20ml,0.5%美蓝水溶液13ml，蒸憾水1000ml将蛋白月东、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馆水中，调整pH为7.2-7.4,分装于烧瓶内，121°C高压灭菌15min0备用。临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50〜55°C,加入伊红和美蓝溶液，摇

6、匀，倾注平板。2蛋白陈水蛋口月东20g,氯化钠5g,葡萄糖，蒸谓水1000ml依次称取蛋白月东，氯化钠与烧杯中，加入蒸徭水，调节pH至7.4。分装小试管，121°C高压灭菌ISmino备用。（葡萄糖蛋白腺水溶液（每100mL蛋白月东水中加入葡萄糖lg））o营养琼脂培养基牛肉膏3g、蛋白月东10g、琼脂20g、NaCI5g＞蒸憾水1000ml依次将牛肉膏、蛋白月东、琼脂、NaCI,溶于1000ml蒸馄水中，调节pH至7.4,分装，121°C高压蒸汽灭菌15mino备用。1.4大肠杆菌诊断血清01（批号200904）,02（批号200901）,05（批号200605）,08（批号

7、200901）,09（扌比号200901）,011（批号200904）,014（批号200211）,015（批号200709）,018（批号200408）,019（批号200709）,020（批号200407）,021（批号200901）,024（批号200709）,026（批号200709）,035（批号200901）,036（批号200505）,050（批号200505）,054（批号200709）,074（批号200211）,078（批号200612）,088（批号200901）,0119（批号2