目的基因的获取课件(实用).ppt

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1、基因工程的基本操作程序专题１基因工程DNA重组技术的基本工具“分子手术刀”“分子缝合针”“分子运输车”复习——限制酶——DNA连接酶——基因进入受体细胞的载体运载体基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接导入棉花细胞棉花植株(有抗虫特性)(含抗虫基因)基因工程的基本操作程序主要包括四个基本步骤一目的基因的获取二基因表达载体的构建三将目的基因导入受体细胞四目的基因的检测与鉴定------结构基因或调控因子2.获取目的基因的常用方法（1）从基因文库中获取

2、（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成一、获取目的基因1.目的基因是指或从细胞中分离与人工合成编码蛋白质，连续不间断原核细胞的基因结构编码区：非编码区①不编码蛋白质。②调控遗传信息表达。原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子转录部位为基因编码区真核细胞的基因结构编码区非编码区：外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列有调控作用，上游有RNA聚合酶结合位点(启动子)。非编码序列：包括非编码区和内含子真核细胞的基因结构编码区非编码区非编

3、码区与RNA聚合酶结合位点启动子终止子编码区上游编码区下游内含子外显子转录部位为基因编码区结构基因外显子内含子转录、加工修饰mRNA非编码区非编码区编码区外显子内含子原核真核基因的结构种类部分基因文库（如:cDNA文库）①.基因文库的概念和种类(1)从基因文库中获取目的基因概念：基因组文库基因文库供体细胞中的DNA许多DNA片段重组质粒限制酶分别与运载体连接不同的受体细胞分别导入②构建基因文库基因组文库B反转录法：②.构建基因文库DNA聚合酶反转录酶cDNAmRNA双链DNA基因重组重组质粒部分基因文库

4、基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因依据目的基因的有关信息如：根据基因的核苷酸序列基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因表达产物蛋白质等特性。③如何从基因文库中得到所需要的基因？(2)利用PCR技术扩增目的基因①概念②原理③前提条件基本条件④方式⑤结果⑥过程模板、原料、酶、能量引物变性、退火、延伸三步曲延伸：加热至70～75℃以目的基因为模板，合成互补的新DNA链变性：加热至90～95℃双链DNA解链成为单链DNA退火：冷却至55~60℃部分引物与模板的单链DNA的特定互补部

5、位相配对和结合变性延伸退火模板DNA95℃PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点50℃引物1引物2DNA引物PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点72℃第1轮结束第2轮开始蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成⑶人工合成目的基因——根据已知的氨基酸序列合成DNA目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是A.某生物的全套基因就

6、是一个基因文库B.将含有某种生物不同的许多DNA片段导入某个生物体内，则这个生物就是一个基因文库C.含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库D.含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文库练习2.在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是①双链DNA分子为模板②ATGTG或TACAC模板链③四种脱氧核苷酸④四种核苷酸⑤DNA聚合酶⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物⑧温度变化⑨恒温A.①③④⑦⑨　B.①④⑥⑦⑧

7、C.①⑤⑥⑦⑨　D.①③⑥⑦⑧3.下列获取目的基因的方法中需要模板链的是①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A.①②③④B.①②③C.②③④D.②③4.在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是A.540个B.8100个C.17280个D.7560个