takara-胶回收试剂盒说明书.docx

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1、操作流程1.使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。2.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。胶块超过300mg时，请使用多个Column进行回收，否则严重影响收率。注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。3.切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块溶解时间，提高DNA回收率。4.称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1mg=1μl进行计

2、算。5.向胶块中加入胶块溶解液BufferGM，BufferGM的加量如下表：凝胶浓度BufferGM使用量1.0％3个凝胶体积量1.0％～1.5％4个凝胶体积量1.5％～2.0％5个凝胶体积量6.均匀混合后室温15-25℃溶解胶块（胶浓度较大或比较难溶时可以在37℃加热）。此时应间断振荡混合，使胶块充分溶解（约5～10分钟）。7.当凝胶完全溶解后，观察溶胶液的颜色，如果溶胶液颜色由黄色变为橙色或粉色，向上述胶块溶解液中加入3M醋酸钠溶液（pH5.2）10μl，均匀混合至溶液恢复黄色。当分离小于400bp的DNA片段时，应在此

3、溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。8.将试剂盒中的SpinColumn安置于CollectionTube上。9.将上述操作步骤7的溶液转移至SpinColumn中，12,000rpm离心1分钟，弃滤液。注）如将滤液再加入SpinColumn中离心一次，可以提高DNA的回收率。10.将700μl的BufferWB加入SpinColumn中，室温12,000rpm离心30秒钟，弃滤液。注）请确认BufferWB中已经加入了指定体积的100%乙醇。11.重复操作步骤10。12.将SpinColumn安置于CollectionTub

4、e上，室温12,000rpm离心1分钟。13.将SpinColumn安置于新的1.5ml的离心管上，在SpinColumn膜的中央处加入30μl灭菌蒸馏水或ElutionBuffer，室温静置1分钟。注）将灭菌蒸馏水或ElutionBuffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。14.室温12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。