提高柱式胶回收试剂盒dna回收效率的最佳条件论文

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1、提高柱式胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳条件论文苏明窦科峰赵爱志李福洋【关键词】DNA/分离和提纯,.freelin;沉淀时加入3/5总体积的异丙醇和1/10总体积的乙酸钠（3molL-1.freelin;沉淀温度为25℃（室温）;用T1液溶解效率高于用水溶;溶解时间为20min（55℃）.这些最佳条件中，大部分都对原来的条件进行了改良.结论应用了改良后的胶回收条件后，胶回收的效率提高到原来的3～4倍.KeyinetheoptimalconditionsforhighDNAextractioneffici

2、encyfromgelsagarosegelsanufacturer.ostoftheconditionsdescribedbythemanufacturerodi┐fied.CONCLUSIONTheDNAextractionefficiencyfroma-garosegelsisimproved3～4times.0引言在抗体库的构建过程中，DNA回收效率的高低对所构建抗体库的质量有十分重要的意义［1-4］，如果DNA回收效率太低，会大大增加工作量，并将有可能损失样本的多样性，进而损害抗体库的质量.我们

3、探讨了如何提高胶回收试剂盒的DNA回收效率，试图摸索出一套能够提高胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳回收条件.1材料和方法1.1材料胶回收试剂盒:由上海华舜生物工程有限公司生产;电泳仪:由大连捷迈科贸有限公司生产（JM-250型）;质粒pDAN5:由意大利Andrein，沉淀时间:30min，溶解时间:30min，直到分别确定出各项操作所需的充分、必要的时间长度.2结果2.1确定S1和异丙醇的用量在不同的S1和异丙醇用量下分别进行胶回收，然后电泳.结果（Fig1）表明:在每一特定的S1用量下，加入3/5总体

4、积的异丙醇的回收效率均高于加入3/10总体积的异丙醇的回收效率.［②①，④③，⑥⑤，⑧⑦］，其中⑥孔的亮度最高.因此，溶胶时每100mg胶加入600μLS1溶液，沉淀时加入3/5总体积的异丙醇，DNA的回收效率最高.图1不同S1和异丙醇用量下的胶回收结果略2.2加入乙酸钠（3molL-1，pH5.2）对DNA回收的作用将加和不加乙酸钠的胶分别回收进行比较，电泳后，结果（Fig2）表明:在每一特定的S1用量下，加乙酸钠后的DNA回收效率均高于不加乙酸钠时的回收效率.［②①，④③，⑥⑤，⑧⑦］因此，加入乙酸纳

5、能够提高DNA的回收效率.2.3沉淀温度在不同的温度（-20℃，25℃，55℃）下进行胶回收，电泳后，结果（Fig3）表明:②③①，因此，沉淀温度以25℃（室温）较为适宜.2.4沉淀时间（25℃）在不同沉淀时间（10，15，20和25min）下进行胶回收，电泳后，结果（Fig4）表明:随着沉淀时间的延长，回收产物也逐渐增加，而20min与25min结果相近.出于节约时间的考虑，20min的沉淀时间较为适宜.2.5溶解时间:（55℃）在不同的溶解时间下进行胶回收，每一长度时间下，分别溶解2次，电泳后，结果（

6、Fig5）表明:随着时间的延长，第1次溶解所得条带亮度逐渐增强［①③⑤⑦］.相反，第2次溶解产物（即:第1次溶解后残留在滤膜上的核酸）的亮度却在不断降低［②④⑥⑧］.溶解20min后，第2次的溶解产物［⑧］已无法看到，说明已达到了充分溶解.因此，溶解时间以20min较为适宜.图2－图4略2.6用水溶和用T1溶的比较（55℃，20min）分别用水或者T1液进行溶解，电泳后，结果（Fig6）表明:在每一特定的溶解时间下，T1液的溶解效率均高于水的溶解效率［①②，③④，⑤⑥，⑦⑧］.因此，用T1液进行溶解将获得

7、较高的回收效率.2.7溶胶时间的长短在不同的溶胶时间（20，15，10和5min）下进行胶回收，电泳后，结果（Fig7）表明:①②③孔的条带亮度较相似，明显高于④孔的亮度.说明，10min即可使胶得到充分的溶解，因此，10min的溶胶时间较为适宜.图6－图7略2.8切胶的质量大小在不同的切胶质量情况（50，70，100，300，500和800mg）下进行胶回收，电泳后，结果（Fig8）表明:①②③④⑤孔的条带亮度较相近，说明当切胶质量比较小时，对回收效率的影响不大.但是，⑥孔的条带亮度明显降低，说明当切胶

8、质量比较大时，将明显降低胶的回收效率.因此，切胶质量要尽量的小.图8略3讨论在分离酶切的DNA片段过程中，琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法.而方便快捷的回收方法及高的DNA回收效率在分子克隆中是十分重要的［5-9］.尤其在构建抗体库的过程中，为了不丢失样品的多样性，减少工作量，高的DNA回收效率显得更加必要.而对于回收的方法，则有许多种，如:玻璃绒法、纸浆法、吸墨纸法及目前通常使用的柱式胶回收试剂盒［10］.其中，试剂盒的便捷性