凝胶DNA(10-50kb)回收试剂盒说明书

《凝胶DNA(10-50kb)回收试剂盒说明书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-87381297凝胶DNA（10-50kb）回收试剂盒说明书产品组成凝胶DNA（10-50kb）回收试剂盒Cat.No.5次样品200300550次制备2003050BufferSIBufferGBufferWG（浓缩液）BufferTE说明书180µl6ml1ml0.5ml1份1.6ml30ml×28ml5ml1份产品储存与有效期产品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保

2、持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail:technical@simgen.cn,电话：400-0099-857。产品介绍本试剂盒适合从多至400mg琼脂糖凝胶中回收DNA（10-50kb），回收率为60~75%。溶胶试剂为不含碘化钠的温和溶解液，确保回收的DNA保持片断完整性和高生物学活性，回收的DNA可直接用于连接、PCR扩增、测序等分子生物学实验。用户需自备的试剂与物品1．无水乙醇2．1.5ml离心管、移液器及吸头3．一次性手套、

3、纸巾及防护用品4．台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子）使用前准备1）如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。2）根据试剂瓶标签上的指示在BufferWG中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。3）将水浴锅的温度设置为50°C。4）可能需要使用3M醋酸钠（pH5.0）。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.2杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F邮编：310030电话：0571-87381

4、295传真：0571-87381297操作步骤1）在紫外灯下将含有DNA片段的琼脂糖凝胶切下，转移到一个洁净的1.5ml离心管中。*尽量切除多余的凝胶体积。如果凝胶体积较大，将其切成碎块有助于缩短溶胶时间。2）称量切下的凝胶重量，加入1倍体积的BufferG（每1mg凝胶换算为1µl凝胶体积）。*比如200mg凝胶应加入200µlBufferG。3）漩涡振荡BufferSI使其中的介质全部悬浮起来，加入30µlBufferSI。4）将装有凝胶的离心管50°C水浴直至凝胶完全溶解（大约5~10分钟）。*溶胶的过程中每隔2-3分钟翻

5、转一次离心管以帮助凝胶溶解，并观察凝胶是否彻底溶解。*BufferG中所添加的染料可帮助观察凝胶是否彻底溶解，同时可指示pH值，溶胶时如果溶液变为紫红色，则应加入10µl3M醋酸钠（pH5.0）使溶液恢复至原来的颜色，否则将影响DNA结合到硅胶颗粒上。5）12000rpm离心30秒，小心地用移液器吸弃上清液。*注意不要吸走管底的沉淀，沉淀中含有DNA。6）加入500µlBufferG，盖上管盖，温和地反复翻转离心管直至沉淀完全分散开来。*此步骤为了去除残留的微量琼脂糖分子。*此步骤不可用漩涡振荡，否则可能导致大片段DNA的断裂。

6、7）12000rpm离心30秒，小心地用移液器吸弃上清液。8）加入700µlBufferWG,盖上管盖，温和地反复翻转离心管使沉淀分散开来。*确认在BufferWG中已经加入无水乙醇。*此步骤不可用漩涡振荡，否则可能导致大片段DNA的断裂。9）12000rpm离心30秒，小心地用移液器吸弃上清液。盖上管盖，低速离心数秒使管壁上的溶液沉淀到管底。10）小心地用20~200µl移液器尽可能吸尽并丢弃上清液。室温晾干沉淀。*沉淀晾干时应呈白色粉末状。*可以将离心管放置到37℃恒温箱中加快干燥速度，但不应用负压干燥，因为负压干燥会导致过

7、度干燥而影响DNA的洗脱效率。11）加入20~30µlBufferTE，用手指轻弹离心管使沉淀分散开来，50℃水浴10分钟。*也可用去离子水洗脱DNA，但应确保所使用的去离子水的pH在7.0-8.5，否则将影响DNA的洗脱效率。12）12000rpm离心30秒，小心地用移液器吸取含有DNA的上清液转移到另一个洁净的离心管中。获得的DNA可立即用于各种分子生物学实验；或者将DNA储存于-20℃备用。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.2