《DNA凝胶回收》pdf版

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1、10/09Ver.1AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中回收多至8μgDNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A溶液)中熔化，其中的保护剂能防止线状DNA在高温下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA选择性结合到膜上。纯化的DNA纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。一、试剂盒组成、贮存、稳定性Cat.No.AP-GX-4AP-GX-50AP-GX-250制备次数4preps50preps250preps制备管4502502ml离心管45025

2、01.5ml离心管450250BufferDE-A6ml2×33ml2×165mlBufferDE-B3ml33ml165mlBufferW12.8ml28ml135mlBufferW2concentrate2.4ml24ml2×72mlEluent1ml5ml25ml说明书111BufferDE-A：凝胶熔化剂，含DNA保护剂，防止DNA在高温下降解。室温密闭贮存。BufferDE-B：结合液（促使大于70bp的DNA片段选择性结合到DNA制备膜上）。室温密闭贮存。BufferW1：洗涤液，室温密闭贮存。BufferW2concentrate：去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加

3、入无水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。二、注意事项1.BufferDE-A(含有β-巯基乙醇)、BufferDE-B和BufferW1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。2.在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。爱思进生物技术（杭州）有限公司电话：0571-

4、88124015传真：0571-88995569E-mail:technical@axygen.com.cnwww.axygen.com.cnPage110/09Ver.13.在步骤2中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA回收率。4.将Eluent或去离子水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。5.DNA分子呈酸性，建议在2.5mMTris-HCl，pH7.0-8.5洗脱液中保存。三、实验准备1.第一次使用前，BufferW2concentrate中加入指定体积的无水乙醇。2.准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。3.准备75°C水浴。4.使用前，检查BufferDE-B是否出现

5、沉淀，若出现沉淀，应于70°C温浴加热熔化并冷却至室温后再使用。四、操作步骤1.在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录1.5ml离心管重量），该重量作为一个凝胶体积（如100mg=100μl体积）。2.加入3个凝胶体积的BufferDE-A，混合均匀后于75°C加热（低熔点琼脂糖凝胶于40°C加热），间断混合（每2-3min），直至凝胶块完全熔化（约6-8min）。*BufferDE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮助观察凝胶是否完全熔化。3.加0.5个BufferDE-A体积的BufferDE-B，混合均匀。当分离的D

6、NA片段小于400bp时，需再加入1个凝胶体积的异丙醇。*加BufferDE-B后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色溶液。步骤4-6可以选择负压法或离心法。A.负压法4A.正确连接负压装置，将DNA制备管插到负压装置的插口上。吸取步骤3中的混合液，转移到制备管中，开启并调节负压至-25-30英寸汞柱，缓慢吸走管中溶液。5A.加500μlBufferW1，吸尽管中溶液。6A.加700μlBufferW2，吸尽管中溶液。以同样的方法再用700μlBufferW2洗涤一次。*确认在BufferW2concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。*两次使用Buffe

7、rW2冲洗能确保盐份被完全清除，消除对后续实验的影响。7A.将制备管置于2ml离心管（试剂盒提供）中，12,000×g离心1min。爱思进生物技术（杭州）有限公司电话：0571-88124015传真：0571-88995569E-mail:technical@axygen.com.cnwww.axygen.com.cnPage210/09Ver.1B.离心法4B.吸取步骤3中的混合液，转移到DNA制备管（置于2ml（试剂盒内提供）离心管）中，12,000×