细胞培养课件.ppt

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1、第二篇动物细胞工程动物细胞工程单克隆抗体养细胞融合与单克隆抗体细胞培养胚胎工程核移植转基因动物细胞融合与单克隆抗体细胞培养胚胎工程干细胞核移植染色体工程4.1培养细胞的生物学特性4.1.1体外培养细胞的类型是否贴壁？？1）贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。2）悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。贴壁型粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式。基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长.培养时：这些细胞被放到体外环境

2、中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴壁型细胞。1、成纤维细胞型：胞体呈梭型，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。3、游走细胞型：呈散在生长，

3、一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。成纤维细胞样细胞名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核成纤维样细胞鸡胚胎成纤维细胞成纤维细胞贴壁和扩展过程上皮样细胞3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形

4、运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。贴壁型细胞附着在某一固相支持物表面才能生长，贴壁后呈现特定的形态特征。如图所示的细胞类型称为.A:成纤维细胞型B:游走细胞型C:上皮型细胞D:多型细胞型√（二）悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。悬浮型细胞4.1.2培养细胞的生长特点正常动物细胞培养的典型特征（P39）核型（染色体）正常，表明没有明显的基因改变细胞的传代次数

5、大约在50代左右，有限的寿命反应了细胞的生长调节细胞无恶性，表现在将该细胞注入免疫抑制动物不能形成肿瘤；贴壁依赖、接触抑制和密度抑制表明其增殖受到抑制，当细胞在介质表面生长至汇合单层时增殖就停止。接触抑制细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制（ContactInhibition）。细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞

6、分裂停止。ContactInhibitiondieproducenewcells4.1.3培养细胞的生长与增殖过程1单个细胞的生长过程LivingCellDynamicsTheNeuronalCellLine2细胞系的生长过程原代培养传代期衰退期4.1.4培养细胞的遗传学特征染色体细胞性别核型正常Barrbody定义：在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体，又称X小体，通常位于间期核膜边缘。1949年，美国学者巴尔（M.L.Barr）等发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体而雄猫却没

7、有。在人类，男性细胞核中很少或根本没有巴氏小体，而女性则有1个。以后研究表明，巴氏小体就是性染色体异固缩的结果。Barrbody巴氏小体------性别鉴定巴氏小体的失活是随机的4.1.5体内外细胞的差异及培养细胞的分化体内外细胞的差异培养细胞的分化4.2细胞培养液4.2.1细胞培养的常用液体水平衡盐溶液消化液消化酶抑制剂pH调整液抗生素液谷氨酰胺补充液血清抑制胰蛋白酶磷酸盐缓冲液Phosphatebufferedsaline(abbreviatedPBS)原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下

8、来，常用的消化液有胰酶（Trypsin）溶液和EDTA溶液，有时也用胶原酶（collagenase）溶液等。PBS:Phosphatebuffered