《细胞培养技术》ppt课件

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1、细胞培养技术细胞培养也叫细胞克隆技术。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。什么是细胞培养？主要内容实验设备试剂及耗材清洗及灭菌细胞培养（细胞生长过程，细胞来源，细胞复苏、传代及冻存，细胞计数，活力测定，细胞污染）一　实验设备超净工作台，生物安全柜CO2培养箱倒置显微镜离心机电热恒温水槽液氮罐纯水仪压力蒸汽消毒器电热干燥箱超净台生物安全柜酒精灯（√），离开要熄灭！酒精灯（×）CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，5

2、％CO2。倒置显微镜离心机电热恒温水槽液氮：-196℃液氮罐配平纯水仪压力蒸汽灭菌器电热干燥箱由工作人员操作，注意安全！小结一　实验设备及功能超净工作台，生物安全柜------操作平台CO2培养箱-------------------------细胞生长的空间倒置显微镜-------------------------观察细胞离心机-------------------------------离心收集细胞电热恒温水槽----------------------加热液氮罐---------------

3、----------------冻存细胞纯水仪-------------------------------制备一级水压力蒸汽消毒器--------------------灭菌电热干燥箱-------------------------烘干器皿（酒精灯安全）二　试剂及耗材培养基缓冲液消化液血清其他耗材培养基供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。成分及作用：氨基酸：组成蛋白质的基本单位碳水化合物：能量来源无机盐：帮助细胞维持渗透压平衡维生素：维持细胞生长的生物活性物质

4、，在细胞代谢中起调节及控制作用培养基分类DMEM（高糖，葡萄糖4500mg/L）：成纤维、上皮细胞（293），一些实体瘤（Panc-1），原代神经元DMEM（低糖，葡萄糖1000mg/L）：间充质干细胞，单抗细胞融合RPMI1640：血液细胞（HL60）、一些实体瘤细胞（BT474）酚红：PH指示剂（黄色过酸、紫色过碱）；酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），涉及到激素和诱导的实验，建议选用无酚红培养基。ATCChttps://www.atcc.org/美国模式培养物集存库缓冲液（洗涤细胞）

5、PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液（常规实验皆可用）。（Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl）D-PBS：杜氏磷酸缓冲液，磷酸盐含量稍低，含有钙镁离子，用于胚胎学方面的研究。Hanks：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平，可作为动植物细胞短期培养(几个小时)。D-Hank’s：不含钙离子、镁离子、葡萄糖（使用消化液时）。消化液胰蛋白酶溶液使细胞间蛋白质水解、细胞离散。使用浓度0.25%。配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清（对胰酶产生抑制作用）

6、的平衡盐溶液（如PBS、D-Hank’s）。EDTA溶液一般用其钠盐，可溶性较好。有些组织需要Ca2+ 、Mg2+来保持其完整性，EDTA可以螯合这些离子，可使细胞之间裂解。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡盐溶液配制。胶原酶溶液主要水解结缔组织中胶原蛋白成分（用胰蛋白酶效果较差），使用Hanks溶液配置，常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）。提供基本营养物质、激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到

7、某些保护作用。保存血清最好的方法？建议血清保存在-20℃。解冻后存放于4℃时，请勿超过一个月。（分装）如何解冻血清才不会使产品质量受损?建议从冷冻箱取出后，置于2～8℃冰箱使之缓慢解冻、融解。使用时，必须将解冻的血清充分混匀，并且勿将血清置于37℃太久。血清青霉素-链霉素溶液青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。分别阻止细菌细胞壁合成及细菌蛋白质的组成，达到抑制细菌生长的作用，防止污染，对真菌和支原体无效。其他实验所需的试剂：药物（如ATRA）、检测试剂（如MTT）、

8、细胞因子（如SCF）等试剂标注规范试剂名称NaCl配制浓度0.5mM配制人张三配制日期2016.10.21耗材培养皿、瓶、孔板离心管、移液管枪尖其他小结二　试剂及耗材的分类及用途培养基（成分、分类）缓冲液（PBS、Hanks等）消化液（分类及应用）血清（作用、存储及解冻方法）试剂标签要规范耗材（分类、用途）在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响培养细胞的生长微生物产品附带杂物上次细胞残留物非营养成分的化学物质需要清洗的培养用品:玻璃器皿、部分需要