细胞培养技术课件.ppt

《细胞培养技术课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、细胞培养技术何惠娟细胞培养技术第一节细胞培养基本知识第二节细胞培养的基本技术第一节细胞培养基本知识一、前言二、培养细胞的特性三、培养细胞的生长过程四、培养细胞生长的条件一.前言1.细胞培养概念2.细胞培养的主要优点3.细胞培养的研究方面4.细胞培养的应用领域1.细胞培养(cellculture)概念从生物体内取出细胞或组织，在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下进行孵育培养，使之生存和生长并维持其结构和功能的技术。体内、外细胞的差异体内细胞：机体神经体液调节和其他类型细胞影响基因表达受到外来信号调节增殖过程中不断发生着分化

2、（由一般到特殊）高度特化的结构和功能体外细胞：失去机体神经体液调节和其他类型细胞影响细胞的许多外来信号被切断特定分化基因表达减弱或停止而进化中保守的增殖活动维持（由特殊到一般）与体内细胞结构和功能的差异特征：失去原有形态，分化特性减弱形态和功能趋于单一一定代数后衰老死亡，或发生转化，获不死性而成为能无限传代2.细胞培养的主要优点研究对象是活的细胞研究的条件可以人为地控制研究的样本，可以达到比较均一性研究的内容便于观察、检测和记录研究的范围比较广泛，多种学科均可利用细胞培养进行研究研究的费用相对较经济3.细胞培养的研究方面1）细胞内的活动：如

3、能量代谢、DNA转录、调亡以及蛋白质的合成2）细胞内部与细胞外界之间的作用：如细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物分泌等3）细胞与细胞之间的相互作用：如形态发生、粘着作用、接触抑制、密度抑制等4）细胞内的流动：如信号的转导、钙离子的流动、RNA的移动、激素受体复合物的易位等5）遗传学：如遗传学分析、转染、转化等4.细胞培养的应用领域1）病毒学2）免疫学3）遗传学4）肿瘤学5）分化及发育6）细胞毒试验7）临床医学及生物技术方面的应用二、培养细胞的特性培养细胞的生长特点贴附贴附贴附是贴附类细胞生长增殖条件之一以成纤维细胞为例，一般

4、在细胞接种后，很快（5-10min）便可见细胞以伪足初期附着，与底物形成一些接触点；接着细胞逐渐呈放射状地伸展开，细胞体的中心部分亦随之扁平；最后细胞成为成纤维细胞的形态。1.培养细胞的生长方式及类型体外培养的细胞，按其生长方式可分为两大类：贴附型为附着于底物（支持物）表面生长的细胞，生长中形成汇片。大多数细胞属此型。形态上失去在体内特有形态。大致分成以下四型：成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形型悬浮型悬浮型少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，尤其是血液白细胞，以及癌肿

5、瘤细胞。细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察时细胞呈圆形。优点：可大量繁殖细胞、传代方便、易于收获细胞。三.培养细胞的生长过程1.单个细胞的生长过程：细胞周期2.细胞系的生长过程3.每代细胞生长过程1.细胞系的生长过程取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前为原代培养或原代细胞。当细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定的细胞密度后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿并补充更新培养液，此即称为传代或再培养。传代生长以后便成为细胞系。体外培养细胞寿命的过程一般可分为三个阶段：原代培养传代期衰退期原代培养：从

6、体内取出细胞接种后到第一次传代。一般维持1－4周。传代期：传代大约数天至1周左右即可重复一次，持续数月，一般传10－50代。随后细胞增殖缓慢以至完全停止，细胞进入衰退期。衰退期：细胞增殖缓慢以至完全停止，细胞死亡。无限细胞系:永久增殖。无限细胞系多发生在传代期末或衰退期，由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体。细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质。2

7、.每代细胞的生长过程传代：培养容器中细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞和更新营养液的过程一代:细胞接种后到下一次传代的一段时间在细胞一代中，细胞能倍增3～6次细胞一代的三个阶段：潜伏期、指数增生期、平台期实验研究多在指数增长期进行。四、培养细胞生长的条件体外培养的细胞需要合适的环境和必须的条件才能生存、繁殖1.细胞的营养需要2.细胞培养环境条件3.无污染及无毒一.细胞的营养需要基本营养物质与体内相同，包括糖、氨基酸、维生素、无机离子、微量元素。促生长因子等物质血清中含有多种生长因子等活性物质，有利于多数细胞的存活和生长；但同时也有些组成

8、不明、对细胞有害的成分。两类基本培养液生长培养液维持培养液基本培养液80～90％95～98％血清10～20％2～5％特殊培养基提供特殊细胞所需的特定营养成分和生长因子。基本营养成