《细胞培养》PPT课件

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1、细胞培养发展历史1885年WilhelmRoux将鸡胚髓板在温热的盐水中维持存活若干天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。1887年Amold把桤木的木髓碎片接种到蛙皮下，当白细胞侵入到木髓碎片后，他将这些白细胞收集到盛有盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活一个短的时间。1902年哈泊兰德预言植物细胞的全能性1903年Jolly将蝾螈的白细胞保存在悬滴中并维持了1个月。1906年Beebe&Ewing在动物的血液中尝试培养了传染狗淋巴肉瘤病毒的细胞。1907年RossHarrison（美国）将蛙胚

2、神经管区的一片组织移植到蛙的淋巴液凝块中，这些组织在体外不但存活若干周，而且居然从细胞中长出了轴突（神经细胞）。意义：１．公认的组织培养开始标志；２．解决了轴突发生的争论；３．培养方法－－将培养物放在盖玻片上并倒置于凹玻片腔中培养。1923AlexisCarrel(surgeon)AseptictechniquesCarrelFlask1912-1946CultureChickenEmbryoFibroblastPlasma+tissuehomogenate在没有抗生素的条件下，使鸡胚心脏细胞维持生存34年，先后

3、传代3400次。1934年荷兰温特发现生长素，并证实了对植物细胞培养的作用1937年高特里特,诺比考特(法)几乎同时离体培养了胡萝卜组织，并使细胞增殖1940年Earle建立了可无限传代的C3H小鼠的结缔组织细胞系－L系（曾在体外经甲基胆蒽转化）。1951年Gay建立了人第一个细胞系－－人体宫颈癌Hela细胞系（原报道为鳞癌，1971年更正为腺癌）。动物细胞的生长动物细胞特性:真核细胞基本结构：亚显微水平(<0.2μm)膜囊结构——质膜，核膜，内膜系统纤维结构——染色质，细胞骨架系统颗粒结构——核糖体细胞器的化学

4、组分：有机分子：蛋白质类（结构蛋白，分泌蛋白，酶等）脂类（磷脂，卵磷脂，脑磷脂，心磷脂）多糖类（糖脂，糖蛋白等）核酸类（DNA,RNA等）固醇类（胆固醇等）无机分子：水（结合水，游离水）无机离子（Na+,K+,Ca2+,Mg2+)细胞质膜生物学特性：对水具有很强的通透性对脂溶性物质的通透性大于非脂溶性物质电阻率很高，一般在109－1011Ω／㎝表面张力较低细胞膜下皮质层:微丝(microfilament,MF)中等纤维(intermediatefilament,IF)微管(microtubule,MT)动物细胞之

5、间的连接形式紧密连接(tightjunction)间隙连接(gapjunction)隔壁连接(separatejunction)——无脊椎动物细胞中间连接(intermediatejunction)——脊椎动物细胞桥粒连接(desmosomejunction)培养细胞的生物学特征1.贴壁型细胞2.悬浮型细胞上皮细胞型成纤维细胞型游走细胞型多形性细胞培养细胞的生长特点1.贴附　影响因素：离子（Ca2+)机械、物理因素（低温、培养液流动过快）生物因素（生长因子）2.接触抑制3.密度抑制培养细胞的生长与增殖过程单个细胞

6、的生长过程细胞周期G1——持续时间长短差异大S——时间较恒定，平均6-8hrG2——对环境敏感M——持续时间很短细胞系的生长过程细胞在培养中存活时间的长短，主要取决于细胞的种类、性状、和原供体的年龄等。三个生长阶段：原代培养期——从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段，一般维持1~4周。传代期衰退期每代细胞的生长过程每代细胞一般经过三个生长阶段：潜伏期指数生长期停止期（平台期）群体细胞的生长过程潜伏期(1atentphase)初代培养细胞贴壁较慢，约24—96小时，连续细胞系和恶性细胞系贴壁较快，<24小时。潜

7、伏期细胞接种量——接种量大比接种量小的潜伏期短潜伏期长短细胞种类——初代培养细胞潜伏期长培养基性质对数生长期(logarithmicgrowthphase)接触抑制(contactinhibition)正常细胞会因为细胞接触而发生相互抑制分裂和限制运动的现象。对数生长期——最具活力时期（细胞分裂旺盛，分裂相增多。）细胞分裂指数(mitoticindex，MI)MI＝(分裂相个数／1000个细胞)×100％稳定期(stationaryphase)培养空间和营养物质有限代谢废物积累新分裂细胞数=死亡细胞数（稳定期）注

8、：细胞代谢活动仍在进行中衰亡期(senescencephase)营养物的耗尽有害物质作用死亡细胞数>分裂细胞数（衰亡期）培养细胞的遗传学特征1.染色质与染色体原代培养多呈二倍体长期传代发生偏离二倍体现象2.细胞性别Barr小体Y小体体内外细胞的差异及培养细胞的分化体内外细胞的差异培养细胞的分化细胞培养液常用液体1.水2.平衡盐溶液3.消化液4.消化酶抑制液5.pH调整液平