课题1微生物的实验室培养课件.ppt

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1、常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌课题1微生物的实验室培养标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多微生物的分离、计数等半固体培养基加入琼脂较少观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物选择培养基添加（或缺少）某种化学物质培养、分离出特定的微生物（一）培养基：具体配方可以不同，但一

2、般都含有水、碳源、氮源和无机盐。选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞可抑制细菌、放线菌细胞壁主要成分肽聚糖的合成其细胞壁是由纤维素、几丁质、葡聚糖组成菌落:单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。（二）无菌技术1.无菌技术的概念：无菌操作

3、泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别灭菌定义：是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽胞、孢子）。是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽胞和孢子。消毒的方法：1、煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min2、巴氏消毒法：70～75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用体积分数为50%～70%酒精溶液等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒灭菌的方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160～170℃下加热1～2h3、高压蒸

4、气灭菌：100kPa、121℃下维持15～30min3.常用的消毒与灭菌的方法：是指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法，紫外线不仅能使核酸、蛋白质变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，从而达到共同杀菌作用。1、灼烧灭菌：灭菌的方法：2、干热灭菌：160～170℃下加热1～2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃条件下维持15～30min。答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判

5、断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手思考：三、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1.计算2.称量3.溶化4.灭菌5.倒平板操作步骤：配方：倒平板技术1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微

6、生物污染培养基。讨论：3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法①平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,

7、将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次划线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.2.划线首尾不能相接3.划线后,培养皿倒置培养划线分离法注意事项:其他画线分离图：1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼

8、烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接