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1、心肌细胞培养方法需药品和器材1、动物：SD大鼠乳鼠（2-3天）十只，用于一个24培养板培养。2、所需液体：2.11640培养基：双蒸水1000ml,溶解一包1640（10.4g）,M2g碳酸氢钠，加入青霉素和链霉索各100U/ml,即加入下列双抗各0.5ml。然后用一个当量的盐酸和NaOH调PH到7.2左右。最后定容至1000ml,摇匀。通常用蔡式滤器（高压灭菌）在超净工作台内过滤除菌后，分装，每100ml瓶装90mlo4°C保存。用时直接加入10ml小牛血清。2.2胰酶消化液：J］夷蛋口酶的作用是使细胞间的蛋门质水解从而使细胞
2、离散。用双蒸水配制浓度0.06%,瞞J1000ml，调PH值到7.3,过滤除菌后,分装每100ml一瓶，-20°C冻存。2.3双抗液：在超净台内完成。（青霉素和链霉素lmg=1667U,10万U=60mg）。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml高压灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml高压灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位，-20°C冻存。用时分装。2.4小牛血清：新买来的血清要在56°C水浴中灭活30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。2.5碳酸氢钠液：2.6盐酸液：2.775%酒精：用于小鼠体表消毒。另外准备
3、酒精棉球用于消毒。3.50ml小烧杯3个，用于剪碎心肌细胞和收集心肌细胞液。250ml烧杯3个，由于小三角瓶的水浴。500ml烧杯1个，用作废液缸。50ml三角烧瓶，内有磁力搅拌子（小转子，酒精擦，双蒸水冲后，再把酒精彻底冲掉后用三角烧杯高压）,用于消化心肌细胞。4.24孔培养板一个。注射器5ml6个（J］夷酶、DMEM、胎牛血清），lml2个（双抗液），20ml备用2个，1000ml微量加样器和枪头。16套离心管及帽，2个试管，8套吸管和胶头。5.温度计一只。PH试纸。酒精灯、打火机/火柴。磁力搅拌器。试管架一个。心肌细胞培养
4、方法需药品和器材1、动物：SD大鼠乳鼠（2-3天）十只，用于一个24培养板培养。2、所需液体：2.11640培养基：双蒸水1000ml,溶解一包1640（10.4g）,M2g碳酸氢钠，加入青霉素和链霉索各100U/ml,即加入下列双抗各0.5ml。然后用一个当量的盐酸和NaOH调PH到7.2左右。最后定容至1000ml,摇匀。通常用蔡式滤器（高压灭菌）在超净工作台内过滤除菌后，分装，每100ml瓶装90mlo4°C保存。用时直接加入10ml小牛血清。2.2胰酶消化液：J］夷蛋口酶的作用是使细胞间的蛋门质水解从而使细胞离散。用双蒸
5、水配制浓度0.06%,瞞J1000ml，调PH值到7.3,过滤除菌后,分装每100ml一瓶，-20°C冻存。2.3双抗液：在超净台内完成。（青霉素和链霉素lmg=1667U,10万U=60mg）。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml高压灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml高压灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位，-20°C冻存。用时分装。2.4小牛血清：新买来的血清要在56°C水浴中灭活30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。2.5碳酸氢钠液：2.6盐酸液：2.775%酒精：用于小鼠体表消毒。另外准备酒精棉球用于
6、消毒。3.50ml小烧杯3个，用于剪碎心肌细胞和收集心肌细胞液。250ml烧杯3个，由于小三角瓶的水浴。500ml烧杯1个，用作废液缸。50ml三角烧瓶，内有磁力搅拌子（小转子，酒精擦，双蒸水冲后，再把酒精彻底冲掉后用三角烧杯高压）,用于消化心肌细胞。4.24孔培养板一个。注射器5ml6个（J］夷酶、DMEM、胎牛血清），lml2个（双抗液），20ml备用2个，1000ml微量加样器和枪头。16套离心管及帽，2个试管，8套吸管和胶头。5.温度计一只。PH试纸。酒精灯、打火机/火柴。磁力搅拌器。试管架一个。10载玻片（用于培养前看
7、接种密度及消化后看细胞密度）。2.大银子2把（一把夹棉球，一把取鼠）。泡沫板1块，针头5只，固定四只和头部。小剪刀4把，小银子4把（一套剪皮肤、一套开胸取心，一套剔除心缘纤维组织，一套剪碎心脏）。二、准备工作：1.提前三小时把胎牛血清、J］夷酶、抗生素拿出来化开。其余未冻药品也提前20分钟拿出来缓和一下。2.用紫外线照30分钟用酒精棉球擦拭台面后把下列物品摆放好，然后开鼓风机吹至实验结束。3.台面：磁力搅拌器、试管架、泡沫塑料板、五个针头、75%酒精及其棉球、大锻子两把、3个250ml烧瓶、1个500ml烧瓶（废液缸）、温度计、
8、PII试纸（事先调PH值）、酒精灯、打火机/火柴、载玻片、6个5ml注射器、1ml2个、2个20ml注射器、1000ml微量加样器。三、实验过程1.定和体表消毒：把两个5ml注射器分别插入1640和胰酶瓶屮，分别向两个小平皿中加入5ml的1640培养液。用一把大
