新生乳大鼠心肌细胞培养

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1、新生乳大鼠心肌细胞原代培养及纯化鉴定威斯腾生物技术中心研究目的•心脏病是一类比较常见的循环系统疾病。•循环系统由心脏、血管和调节血液循环的神经体液组织构成，循环系统疾病也称为心血管病。•如：冠状动脉粥样硬化性心脏病、风湿性心脏病、高血压性心脏病、肺源性心脏病、感染性心脏病、内分泌性心脏病、血液病性心脏病、营养代谢性心脏病等。研究心肌细胞体外培养非常重要！！！心肌细胞原代培养步骤：•1.取出生7天内新生乳大鼠，无菌条件下开胸取心尖部位，用预冷的PBS溶液润洗3遍。•2.将组织剪碎，加入0.125%的胰酶，在37度恒温水浴锅中，采用分次消化，每次消化5分钟，一共消化8~10次。•3.每次消

2、化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM/F12培养基，轻轻混匀，中和胰酶的消化，防止消化多度。最后1000R/MIN离心5分钟。离心后收集沉淀，用PBS再次重复离心3次。•4.最后离心后的细胞即为心尖部原代分离的单细胞。加适量培养基，于培养箱中培养。心肌细胞的纯化•主要是去除心肌成纤维细胞•1.差速贴壁法：心肌成纤维细胞先贴壁，所以在培养90分钟左右，将未贴壁的细胞悬液吸出。此时已经贴壁的是心肌成纤维细胞。•2.用BRDU筛选：上述步骤中吸出的未贴壁的细胞，在继续培养前，加入终浓度为0.1mmol/LBRDU，可抑制心肌成纤维细胞的生长。心肌细胞的特点•1.与心脏组织一样可观察到

3、搏动•2.不能传代，其搏动率在培养第4天达到最大，第7天后逐渐消失。•3.纯度不能达到100%心肌细胞体外培养的特点•正常的心脏组织收缩心肌细胞体外培养的特点•体外培养的心肌细胞收缩http://v.youku.com/v_show/id_XNDY0NjY1NDQ=.html心肌细胞的鉴定•鉴定手段：免疫组化/免疫荧光/流式表面抗原检测谢谢！