流式细胞术在小鼠局部淋巴结试验中的应用研究.pdf

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1、中国预防医学杂志2014年9月第15卷第5期ChinPrevMed，Sep．2014，Vo1．15No．5·论著流式细胞术在小鼠局部淋巴结试验中的应用研究徐剑，刘芳，林师道，胡成云，岑江杰，纪磊，陈杰浙江省化工研究院有限公司，浙江杭州310023摘要：目的将流式细胞术应用到小鼠局部淋巴结实验(1ocallymphnodeassay，LINA)中，期望建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的方法。方法受试物分为溶剂对照[AOO(丙酮：橄榄油一4：1)]、阴性对照(NaC1)、致敏阳性物[己基肉桂醛(HCA)、2，4一二

2、硝基氯苯(DNCB)、2-氨基酚(2一APC)]、刺激阳性物EKOH、十二烷基硫酸钠(SLS)]。采用8～10周龄16～22g的雌性Balb／c小鼠76只，随机分为19个受试物剂量组，每剂量组4只小鼠。每种受试物分别设低、中、高3个剂量组，检测浓度分别为NaC1(100g／L、200g／I、300g／L)、HCA(／V：3．3、10．0、30．0)、DNCB(2．5g／L、5．0g／I一10．0g／I)、2-APC(12．5g／I25．0g／L、50．0g／L)、KOH(25g／L、50g／L、100g／L)、SLS(5

3、0g／i、100g／I、200g／L)。于试验第1、2、3天将配制后不同浓度受试物稀释液以每耳25／A／d均匀涂布于小鼠双侧耳后。检测小鼠耳缘厚度、耳引流淋巴结重量、B220(CD45R)亚群淋巴细胞百分数等指标。采用SPSS11．5分析软件，对数据型指标进行方差分析，并对有差异的个体再行LSD两两比较，并根据刺激指数对受试物致敏性大小进行分级。结果与溶剂对照比较中高剂量的sIs和KOH均可引起小鼠耳缘厚度增加(P

4、3，可以判断该3种化学物为皮肤致敏物。根据sI计算EC3的值，对致敏物进行分类：DNCB(0．196)为强致敏物，HCA(1．556)和2-APC(3．156)为中等致敏物。结论应用流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测B220(CD45R)亚群淋巴细胞百分数作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验，结合耳缘厚度检测可实现同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。关键词：局部淋巴结试验；小鼠；致敏性；刺激性；流式细胞术中图分类号：R114；R994．6文献标识码：A文章编号：1009—6639(2014)05—04

5、77—05ApplicationofflowcytometryonmurinelocallymphnodeassayxuJian，LIUFang，LINShi—dao，HUCheng—yun，CENJiang—jie，JILei，CHENJieZhejiangResearchInstituteoJChemicalIndustry，LTD．，Hangzhou，Zhejiang310023，ChinaC0rn0”gauthor：XUJian，E-mail：“一jian@sinochem．comAbstract：Objecti

6、veToexplorethepotentialapplicationofflowcytometryinmurinelocallymphnodesassay(LINA)fortestingbothchemicalsensitizationandirritation．MethodsTestsubstancesusedinthestudyincludedsolventcontro1(A00)，negativecontro1(NaC1)，sensitizers(HCA，DNCBand2-APC)andirritants(K()H

7、，SIS)，andeachtestingmaterialwaspreparedatlow，mediumandhighdoses(NaC1100，200，300g／I，HCA3．3，10，30，DNCB2．5，5．0，10．0g／L，2-APC12．5，25．0，50．0g／L，KOH25，50，100g／ml，SIS50，100，200g／I)．76femaleBalb／cmiceaged8-10weekswereevenlydividedinto19tes—tinggroupsandwascoatedwith25u1p

8、erearofdifferentdosageoftestingmaterialaroundthebackofbothearsinthefirst3days．Thethicknessofear，eardrainagelymphnodesweightandlymphocytepercentageofB220(CD45R)