硬叶兜兰SRAP-PCR体系建立及亲缘关系研究.pdf

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1、基因组学与应用生物学，2014年，第33卷，第1期，第168—173页GenomicsandAppliedBiology，2014，Vo1．33，No．1，168—173技术专题TechnologyFeature硬叶兜兰SRAP—PCR体系建立及亲缘关系研究李宗艳李静郭荣z秦艳玲1西南林业大学园林学院，昆明，650224；2西南林业大学基础部，昆明，650224通讯作者gr@swfu．edu．cn摘要采用CTAB法对硬叶兜兰叶片总DNA进行提取，通过正交实验设计，用SRAP正向引物me1(5'-TGAG

2、TCCAAACCGGATA一3’)和反向引物em2(5'-ACACACACACACACACT一3’)对反应体系进行优化；并应用其进行种群遗传差异分析。结果表明：优化的20L的PCR反应体系中DNA模板为90ng，TaqDNA聚合酶1．6U，dNTPs0．30mmol／L，MgC122．0mmol／L和引物各O．50txmol／L，经重复电泳验适合进行硬叶兜兰的SRAP分析；利用该体系对7个不同种源的167份硬叶兜兰进行SRAP．PCR扩增，对筛选的10个引物扩增，共得到288条条带，其中多样性条带234

3、条，多态位点百分率(PPB)为81．25％；种群的遗传距离值在0．0659-0．1916，UPGMA聚类结果显示供试种群在遗传相似度为0．863时，可以分为2支，艮．J第分支马固、斗咀和杨柳井居群组成，第二支由古林箐、夹寒箐、小坝子和刚坝居群组成。SRAP标记可较好地适用于硬叶兜兰种群遗传差异的鉴定。关键词硬叶兜兰，SRAP．PCR反应体系，遗传变异，亲缘关系GeneticRelationshipAnalysisofPaphiopedilummicranthumBasedonSRAPTechnology

4、LiZongyanLiJingGuoRongQingYanling1LandscapeandArchitectureCollege，SouthwestForestryUniversity，Kunming，650224；2FundamentalDepartmentKunming，650224Correspondingauthor，gr@swfu．edu．cnDOI：10．13417／j．gab．033．000168AbstractGeneticdiversitywasdetectedinthesevenp

5、opulationsofPaphiopedilummicranthumbyaSRAPmarker．TotalDNAofPaphiopedilummicranthumwasextractedfromfleshleavesbyamodifedCTABmethod．Anorthogonaldesignwasusedtooptimizeanamplificationsystemwithapairoftheprimercombination(melse—quence：5’一TGAGTCCAAACCGGATA一3’

6、；era2sequence：5'-ACACACACACACACACT一3’1．Theresultsindi—catedthatasuitableamplificationsystemcontained90ngDNAtemplate，0．30mmol／LdNTPs2．0mmol／LMgcl2，，1．6UDNApolymeraseand0．5bLmol／Leachprimerinthe20IxLPCRvolume，withwhichthedistinct，repro—ducible，well-resolve

7、dbandscouldbeproducedbytherepeatedgelelectrophoresis．Theoptimizationreactionsys—temcouldbeusedintheresearchonmicranthum．167samplesfromsevenpopulationsweredrawntodetectitsgeneticdiversitywithtenprimerpairsscreenedbythisoptimizationreactionsystem．Atotalof2

8、88amplifiedbandswereobtained，amongwhich234bandswerepolymorphicandaccountedfor81．25％．Geneticdistancea．mongthesevenpopulationsvariedfrom0．0659to0．1916．BasedontheUPGMAclusterdendrogram．thesevenpopulationsweredividedintotwogro