桑树SRAP-PCR反应体系的建立与优化.pdf

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1、广西农业科学2010，41(11)：1151—1154GuangxiA咖cIIltⅢdSciences桑树SRAP—PCR反应体系的建立与优化林强·，邱长玉1，朱方容1，赵卫国z，陈小青-，黄旭华1，朱光书，，李乙-，曾燕蓉1(1广西蚕业科学研究院，南宁530007；2中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江212018)摘要：以广西地方桑树种质资源“平武l号”为材料，以引物组合Me8／Em3对其SRAP反应体系的模板DNA、引物、dNTPs和TaqDNA聚合酶等条件进行优化。结果表明，最优反应体系为：在

2、25．0p．L反应体系中含模板DNA45．0ng，引物1．0p,mol／L，dNTPs0．3mmol／L。％q酶1．0U。用42个引物组合对6份桑树二倍体品系(农桑8号、璜桑37号、湖桑197号、湖桑32号、湖桑199号、育711、桐乡青、国桑20号)及其同源四倍体进行扩增，其中引物组合Me6／Em2的扩增条带清晰，品种间有不同程度的多态性。该研究建立的反应体系应用于桑树遗传多样性研究，重复性好，稳定性强，结果可靠，可用于下一步研究。关键词：桑树；sRAP-PcR反应体系；优化中图分类号：$888．

3、3文献标识码：A文章编号：1002—8161(20LO)11-1151--04OptimizationofSRAP-PCRmethodformulberryLINQian91，QIUChang-yul，ZHUFang-ron91，ZHAOWei-gu02，CHENXiao-qin91，HUANGXu-hual，ZHUGuang-shul，LIYil，ZENGYan-ron91(1GuangxiSericuhureTechnologyExtensionStation，Nanning530007，Chi

4、na；2SeficultureResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Zhenji；ng，Jiangsu212018，China)Abstract：Theexperimentwagconductedtoopts"mizetheconcentrationoftemplateDNA，primer,dNTPsandTaqDNApolymeraseinSRAPreactionsystemformulberryvarietyPingwu1．

5、Theresultsshowedthattheoptimumreactionsystemina25．0IzLPCRmixtureconsistedof45nggenomicDNA。1．0pumol／Lprime格，0．3mmol／LofdN7FPs，and1UTaqpolymerase．Fourty-twoprimercombinationswereusedtoconducttheSRAP-PCRamplificationofsixmulberrydiploidspeciesandtheirauto

6、tetmploids．TheresultsindicatedclearamplifiedbandsshowingpolymorphismamongdifferentspecieswhenamplifiedwithprimerMe6／Em2．ThePCRmethoddevelopedinthisresearchshowedgoodrepeatabilityandhishstabilitywhenappliedtostudythegeneticdiversityinmulberry．andcouldbe

7、usedinthefutureresearch．Keywords：mulberry；SRAPreactionsystem；optimization相关序列扩增多态性(Sequence-relatedampli—fledpolymorphism，SRAP)是一种基于PCR而发展起来的新型分子标记技术，于2001年由美国加州大学作物系“和Quiros[-]提出。其引物是基于外显子富含GC、启动子、内含子富含AT的特点设计而成。通过这种独特的引物设计优先扩增基因组内的开放阅读框(ORFs)．其多态性可能因

8、内含子或启动子在个体间的变异而产生。该技术具有简便稳定、高通量等优点【2]。已被用于甘蓝【21、西葫芦[31、野牛草【4】、棉花【51等遗传图谱的构建或遗传多样性的分析；赵卫国等【6】首次应用SRAP标记分析了桑树遗传多样性。由于SRAP标记是基于PCR的标记，其反应条件易受各种因素的干扰．因此为确保SRAP分析结果的可靠性和重复性，需对SRAP—PCR反应体系进行优化。桑树是异花授粉植物。易发生基因重组和分离．遗传变异极为丰富。近年来，随着分子生物学的发展．DNA分