菰SRAP—PCR反应体系的优化与建立-论文.pdf

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1、热带作物学报2014，35(2)：299—306ChineseJournalofTropica1Crops菰SRAP—PCR反应体系的优化与建立任绪瑞1,2，刘艳玲z，杨美2，陈媛媛，王冬良，陈友根1安徽农业大学园艺学院．安徽合肥2300362中国科学院武汉植物园水生植物与流域生态重点实验室，湖北武汉430074摘要利用单因素分析法对影响菰SRAP～PCR扩增效果的Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶、DNA模板和引物浓度5种因素进行了优化。结果表明：建立了适合菰基因组的SRAP—PCR的体系：1L10xBuffer、0．5U

2、raqDNA聚合酶、2mmol／LMgC1，、50ng模板DNA、0．20mmol／LdNTPs、正反向引物的浓度各为0．7~mol／L，共10L。选取5对引物．利用该体系对72份菰样本进行PCR扩增，共获得132条清晰的谱带，其中91条具有多态性，比率为68．9％菰SRAP—PCR反应体系的优化和建立将为利用该标记进行种质遗传多样性分析和连锁网谱构建等研究提供技术支持关键词菰：SRAP：PCR反应体系：优化中图分类号S511．9文献标识码AOptimizationandEstablishmentofSRAP—PCRinZi

3、zanialattfoliaRENXurui-2，UUYanling，YANGMei，CHENYuanyuan，WANGDongliang，CHENYougen1CollegeofHoriicuhure，AnhuiAgricuhuralUniversity,Hefei,Anhui230036,China2KeyLaboratoryofAquaticPlantandWatershedEcology,WuhanBotanic~Garden，ChineseAcademyofSciences，Wuhan,Hubei430074，Ch

4、inaAbstractWeestablishedanadvancedSRAP—PCRreactionsystemforZizanialotifoliausingasinglefactorexperimentwithfiveimpactfactors，includingDNAtemplate，Mg2，dNTPsmixture，TaqDNApolymeraseandprimer．The10Lreactionmixturecontained50ngofgenomicDNAtemplate，1Lof10xBufer，2mmol／Lo

5、fMgC12，0．20mmoYLofdNTP，0．5UofTaqDNApolymerase，and0．7~xmol／Lofprimers．TotestthestabilityoftheoptimizedSRAP—PCRsystem．thePCRwasfurtheramplifiedinZlotliawith72individualsusing5primerpairs．Atotalof132clearbandswereobtainedthroughoutallmaterials，ofwhich91f68．9％1bandswer

6、epolymorphic．ThereforetheestablishedSRAPreactionsystemforZlotliawasreliable．Theresultsprovidedmaturetechnicalsuppoflforevaluatinggeneticdiversityandconstructinggeneticlinkagemapsofzlatifolia．KeywordsZizanialcu：ifolia；SRAP；PCRreactionsystem；Optimizationdoi10．3969~．i

7、ssn．1000—2561．2014．02．0l5SRAP(Sequence—relatedamplifiedpolymorphism，亲缘关系较近，且菰具有高产、抗逆性强等优点．序列相关扩增多态性)是一种不同于RAPD、SSR、是水稻品种改良的重要种质资源『11]野生菰分布广AFLP、SNP的分子标记方法，由美国加州大学作泛．在许多湿地中是优势种或建群种．对于湖岸物系的Lj等【1_于2001年从芸苔属Brassic0L．)植物带的稳定具有重要的生态功能虽然野生菰资源具中研发而来。该标记因具有稳定、简单和易于测序有重要的育种

8、价值和生态功能．目前关于菰野生种等特性而被广泛应用于植物的品种鉴定[21、遗传多群的遗传多样性研究却十分有限．应用的标记有样性分析[31、遗传图谱构建l4等研究，其研究对象Adhla序列l31和SSR标记SRAP作为一种新型分涉及果树[61、蔬菜[7和粮食作物等。子标记．虽然在菰品种资源的