资源描述：
《竹子SRAP_PCR体系的建立与优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第30卷第4期中南林业科技大学学报Vol.30No.42010年4月JournalofCentralSouthUniversityofForestry&TechnologyMar.2010竹子SRAP2PCR体系的建立与优化112113任立宁,郭起荣,何高峰,徐振国,孙立方,王青(1.国际竹藤网络中心,北京朝阳区100102;2.南昌市林业局,江西南昌330038;3.北京林业大学,北京海淀区100083)摘要:首次报道竹类植物SRAP2PCR反应体系的建立与优化。以竹叶总DNA为模板,经过大量实验,建立和优2+化了竹子SRAP2PCR的50μL反应体系,20ng模板DNA,2
2、.0mmo1/LMg,175μmol/LdNTPs,0.2μmol/L引物,115UTaqDNA聚合酶,5μL10×buffer,退火温度52℃为最优反应组合。该反应条件下扩增条带清晰,多态性丰富。关键词:竹子;SRAP2PCR;反应体系;优化中图分类号:S795;Q75文献标志码:A文章编号:1673-923X(2010)04-0056-05EstablishmentandoptimizationofSRAP2PCRreactionforbamboos112113RENLi2ning,GUOQi2rong,HEGao2feng,XUZhen2guo,SUNLi2fang,WA
3、NGQing(1.InternationalCentreforBambooandRattan,ICBR,Chaoyang100102,Beijing,China;2.NanchangForestryBureau,Nanchang330038,Jiangxi,China;3.BeijingForestryUniversity,Haidian100083,Beijing,China)Abstract:ByusingtotalDNAfrombambooleavesastestedsamples,thestable50μLreactionsystemwasestab2lishedaft
4、eralargenumberofexperiments,whichisthefirstreportofbambooSRAP2PCRreactionsystem.The2+bestcombinationofreactionconsistsof20ngDNAtemplate,2.0mmo1/LMg,175μmol/LdNTPs,0.2μmol/Lprimer,1.5UTaqDNApolymerase,5μL10×buffer,andannealingtemperatureof52℃.Underthisresponsecondition,theamplifiedbandwasclea
5、randhasrichpolymorphism.Keywords:bamboo;SRAP2PCR;responsesystem;optimization选择高效、合适的标记方法一直是研究生物遗样性分析、遗传图谱的构建、重要性状的标记以及相传背景的基本手段。SRAP(相关序列扩增多态性,关基因的克隆等方面,并已在小麦、水稻、棉花、红花、Sequence2relatedamplifiedpolymorphism)是一种新型八仙花、白菜、马铃薯、辣椒、西瓜、菠萝、黄瓜、桃、枣、[3-16]的标记系统,又称基于序列扩增多态性(sequence2杨树等植物中成功应用。SRAP分子标记是基
6、[1]basedamplifiedpolymorphism,SBAP),是由美国于PCR的标记,其反应条件易受各种因素的干扰,对加洲大学蔬菜系Li和Quiros博士于2001年芸薹属实验结果产生影响。本研究首次构建了竹类植物[2]2+植物开发出来。该标记具有简便、高效、产率高、高SRAP2PCR反应体系,并对模板DNA浓度、Mg浓共显性、重复性好、易测序,以及便于克隆目标片段度、dNTPs浓度、引物浓度TaqDNA聚合酶、退火温的特点,目前被认为是DNA分子标记中多态性最为度等因子进行了优化,建立了一套适合竹子SRAP2丰富的一项技术。SRAP已被成功地应用于遗传多PCR反应体
7、系,为毛竹、桂竹等竹类植物进行分子遗收稿日期:2009-12-25基金项目:科技部平台项目“林木(含竹藤花卉)种质资源标准化整理、整合及共享”(2005DKA21003)作者简介:任立宁(1983-),男,河北邢台人,硕士研究生,主要从事竹类种质资源研究第4期任立宁,等:竹子SRAP2PCR体系的建立与优化57传学研究提供了基础。试验所用TaqDNA聚合酶、10×PCRbuffer、2+Mg、dNTPs均购自TaKaRa公司;SRAP引物采1材料和方法用Li和Quiros已发表的引物组合,由
