金龙胆草SRAP银染反应体系的建立与优化-论文.pdf

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1、广东农业科学2014年第1期l2l金龙胆草SRAP银染反应体系的建立与优化刘姗1，2，高玉莲，孙蓉，唐自钟，高静雷，陈(1．四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014；2．攀枝花学院生物与化学工程学院，四川攀枝花617000)摘要：建立适宜金龙胆草DNA的SRAP—PCR扩增体系，为金龙胆草分子标记打下基础。针对常规银染方法从是否固定、银染液组成、银染时间、显影液组成等方面优化了金龙胆草SRAP扩增产物的检测方法，同时探索了金龙胆草SRAP—PCR反应程序．并对金龙胆草SRAP—PCR反应体系的各影响因子进行优化。结果建立了一个银染步骤快速、高效的银染检查方法，筛选的退火温度为5

2、1．3℃，最佳SRAP—PCR反应体系(15L)为：DNA40ng，引物浓度0．7I~mol／L，dNTPs0．25mmol／L，Mg2+1．9mmol／L，Taq聚合酶0．6U，10~buffer2ILL，双蒸水补足。该程序和体系能很好地满足金龙胆草基因组SRAP扩增的要求，SRAP标记应用于金龙胆草遗传研究是可行的。关键词：金龙胆草；SRAP；PCR体系优化中图分类号：$567．23文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)01—0121—06EstablishmentandoptimizationofSRAPsilver-stainedreactionofConyzab

3、liniiL6v1．LIUShan，GAOYu—lian，SUNRong，TANGZi-zhong，GAOJing-lei，CHENHui(1．CollegeofBiologyandScience，SichuanAgriculturalUniversity,Yaan625014,China；2．DepartmentofBiologicalandChemicalEngineering,PanzhihuaUniversity,Panzhihua617000，China)Abstract：ToestablishappropriateDNASRAP—PCRamplificationsystemo

4、fConyzabliniiL6v1．andlaythefoundationforthemolecularmarkersofc-bliniiL6v1．fourfactorsofthesilver—stainedwereoptimized，includingwhetherfixed，dyerecipe，silverstainingtimeandcompositionofdeveloper．ThisresearchalsoexploredtheSRAP—PCRreactionprocessandoptimizedtheamplificationsystemofebliniibyvariousf

5、actors．TheresultsshowedthattheannealingtemperatureofSRAP—PCRreactionprogramwas51．3~C，andtheoptimumSRAP_PCRsystem(15L)wasasfollows：DNA40ng，primer0．7Ixmol／L'dNTPs0．25mmoI／L,Mg1．9mmol／L，polymerase0．6U，10xbuffer2IxL．Theprogramandsystemweresuitableforsilver-stainedanalysisandwereapplicableinCbliniiL6v

6、1．withSRAPmarker．Keywords：Conyzabliniiv1．：SRAP；PCRsystemoptimization金龙胆草为菊科白酒草属植物苦蒿(Conyzablinii系统，由美国加州大学蔬菜作物系Li等于2001年提L6v1．)的干燥地上部分，主要产于四川I攀西地区以及云出[31，主要是对ORFs进行扩增，提高了扩增结果与表现南中、南部，贵州部分地区，具有清热化痰、止咳平喘、型的相关性，既克服了RAPD重复性差的缺点，又克服解毒利湿、凉血止血的功效。近年研究发现其具有一定了AFLP技术复杂、成本昂贵的缺点，具有简便、稳定、的抗肿瘤活性Ⅲ。金龙胆草已收录于中国药典

7、2010年产率高、便于克隆目标片段的特点[41，对于研究基础较版一部翻及《四川I省药品标准》。目前该植物的系统研究薄弱的作物尤为适用。银染是SRAP标记常用的产物时间较短，涉及到种内遗传关系及遗传多样性等方面检测方法，成本较高，耗时较长。本研究首次对金龙胆的研究还不深入。草基因组SRAP分析，并进行反应体系建立与优化，以相关序列扩增多态性fsequence—relatedamplified期建立经济适用的SRAP反应体系，为开展金龙